10-肿瘤分子生物标志物流式定量剖析.pptVIP

肿瘤分子生物标志物的流式定量分析 一、DNA异倍体 ㈠癌前病变出现DNA异倍体及在癌变早期诊断的意义。 二、抑癌基因P53蛋白 三、癌基因蛋白产物 ㈡ 癌基因C-erbB-2蛋白产物 四、肿瘤转移基因CD44 五、血型糖蛋白A (GlyCopt1orin A. GPA) 六、肿瘤多药抗药性基因蛋白的流式分析 目前研究最多是c-erbB-2癌基因蛋白与乳腺癌的关系，很多文献报道了C-erbB-2在乳癌细胞中的过量表达与乳癌的组织分级，淋巴结转移及激素受体、细胞增殖周期和DNA倍体以及和临床预后关系。 有人应用流式细胞术的免疫荧光技术定量研究了乳腺癌、乳腺囊性增生和囊性增生癌变细胞的C-erbB-2蛋白表达，发现囊性增生和囊增癌变细胞的C-erbB-2蛋白表达量逐渐增高，提示在囊性增生并癌变的过程中，C-erbB-2蛋白的过量表达是早期癌变的一个标志物，可作为乳癌早期诊断的一个参考指标。 他们的研究还发现，C-erbB-2蛋白过量表达的乳癌，DNA含量常为异倍体，且增殖指数也增高。 说明C-erbB-2蛋白过量表达对加速细胞DNA合成和细胞增殖有重要作用，大部分研究报道认为，乳腺癌细胞中C-erbB-2蛋白的表达与如下参量有关： ①与组织学分级有关，随分级的增高，C-erbB-2呈现高表达。 ②与淋巴结转移和无转移有关。 ③与DNA倍体有关，二倍体肿瘤表达量低，异倍体肿瘤表达高。 ④与雌激素受体有关，C-erbB-2蛋白过量表达的乳癌，受体常为阴性。而表达量低的乳癌，受体常为阳性。 ⑤与临床预后有关，C-erbB-2表达过量的乳癌，无病生存期和总存活期明显缩短，常出现肿瘤复发，而C-erbB-2蛋白表达量低，预后较好，认为是一个重要的预后参数。 CD44基因位于人类11号染色体的短臂上，可分为两种类型，按其外显子表达方式，可称为组成型CD44S和变异型CD44V。 研究表明，正常情况下，CD44S基因蛋白是广泛存在细胞膜的跨膜糖蛋白，在大多数上皮细胞、间质细胞和淋巴细胞等均可以检测到该糖蛋白的表达，研究发现，CD44基因蛋白的作用，主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性连接，有如下功用: ①介导淋巴细胞与毛细血管的小静脉内皮细胞的结合。 ②参与淋巴细胞的活化。 ③能与细胞外基质中的透明质酸胶原蛋白、纤维粘连蛋白、层连蛋白分子结合。 ④参与细胞骨架蛋白结合，使细胞伪足形成，参与细胞迁移运动。 变异型CD44V基因与肿瘤转移的关系，是近期人们最新的实验中发现的，目前已成为研究肿瘤转移的一个新的热点课题。 研究发现，正常组织中和没有转移能力的恶性细胞主要有 CD44S基因蛋白表达，而具有转移能力的恶性细胞主要是变异型CD44V基因蛋白的高表达，但在正常上皮细胞中变异型CD44V仅有很弱的表达，确切证实变异型CD44V基因与肿瘤转移有关，是在1991年德国学者Gunth-er等首先报道了他们突破性研究结果。 他们从大鼠胰腺癌细胞中分离到了具有转移能力的细胞株和没有转移能力的细胞株，然后用具有转移能力的细胞膜蛋白作为抗原，制备出了单抗肿瘤细胞与抗体结合，而不与没有转移能力的细胞结合，经过对这一单抗的序列分析后证实为变异型CD44V基因蛋白。 将变异型CD44V基因首先用于临床肿瘤标本的研究是英国学者Matsumura和他的同事们，他们检测了乳腺癌和结肠癌，发现转移癌都有高水平的CD44V表达而从非转移癌细胞仅能检出很弱的表达。 最近有学者应用流式细胞术和抗人CD44单克隆抗体，对种植于小鼠体内黑色素瘤细胞进行了研究分析，认为CD44在肿瘤的生长和转移机制中具有重要作用。 我们应用流式细胞术分析了膀胱癌，乳腺癌细胞的变异型CD44V基因蛋白产物的表达，发现有淋巴结转移的乳癌均有强的表达量，无淋巴结转移的乳癌仅有较弱的表达量。变异型CD44基因蛋白的表达和肿瘤转移的关系的研究尚处于初步研究阶段。 有许多未知有待更深入的探讨，相信随着CD44基因的研究进一步深入将会为肿瘤的转移和诊断提供新的标志物。 人类体细胞突变的发生，及其在癌发生的生物分子机制中的作用研究，越来越引起肿瘤学者的极大关注。当人体遭受到致癌因子的损害后，存在于骨髓中的红系造血干细胞的血型糖蛋白A基因位点发生突变，并产生变异的子代红细胞，这种改变可成为一种标记而长期保留下来，而形成红细胞变异株。变异株红细胞表面所携带有GPA抗原(即 M/N血型决定簇)，这种变异的GPA抗原物质是一种特异性的标志物，它的一对等位基因位于染色体4Q28-31 。 目前，已经分离克隆出抗变异型红细胞GPA的单克隆抗体，用荧光探针标记这些抗体就可用流式细胞术检测这些血液中红细胞的GPA变异株的频率，为研究人类活体细胞突变找到一个简便的新方法。 有作者使用流式细胞术并