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核酸提取经验及原理总结 主办单位：螺旋网 主讲人：wsuquan 时 间：2008.4.21 主要内容 一、核酸的发现 、核酸的分类和功能 、 核酸的理化性质 二、细胞裂解 三、核酸提取 四、核酸纯化 五、核酸检测 六、核酸除杂质 核酸的发现 核酸是1869年米 歇尔(F.Miescher)在脓液 的白细胞中发现的，他 当时称之为核素。阿尔 特曼(R.Altmann)于1889年 认识其酸性后，定名为核 酸。核酸分为核糖核酸 (RNA)和脱氧核糖核酸 (DNA)两大类。 脱氧核糖核酸（DNA） DNA分子含有生物物种的所有遗传信息，分子量一般都很大（除RNA病毒外）。 DNA为双链分子，其中大多数是链状结构大分子，也有少部分呈环状结构。 核糖核酸（RNA） RNA主要是负责DNA遗传信息的翻译和表达，分子量要比DNA小得多。RNA为单链分子， 根据RNA的功能，可以分为三种： 信使核糖核酸（mRNA）； 转运核糖核酸（tRNA）； 核蛋白体核糖核酸（rRNA）。 核酸的理化性质 RNA的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离核酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L，DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。 细胞裂解 裂解原理 细胞的裂解方法 裂解方法的评价 样品与裂解液的比例 细胞裂解-裂解原理 经典的裂解液几乎都含有去污剂 和盐 。盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境 ，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏 、维持核酸结构的稳定 等。去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶，利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。 细胞裂解-细胞的裂解方法 机械方法 化学试剂法 反复冻融法 酶解法 细胞裂解-裂解方法的评价 含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组 DNA 的首选 。 高浓度蛋白质变性剂 (如 GIT、GuHCl 等) 的裂解方法，是抽提 RNA 的首选 。 含 CTAB 的裂解液，几乎成为富含多糖的样品，如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。 SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法，具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的特点。 细胞裂解-样品与裂解液的比例 裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。另外，裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的，而不是以核酸含量为基准，这一点务必牢记。 核酸提取 提取是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程。 DNA提取的几种方法 1 浓盐法 2 阴离子去污剂法 4 水抽提法 3 苯酚抽提法 RNA提取 总RNA的试剂盒快速提取? 蛋白酶－热酚法 氯化锂法提取总RNA 核酸纯化-方法 经典的