UPLC–QTOFMS在相关研究方向的应用.pptVIP

UPLC-QTOFMS在相关研究方向的应用 安捷伦1260液相色谱-G6530三级四极杆飞行时间质谱联用仪（UPLC-QTOF） 前 言 液相色谱用户现在又有了新的需求； 首先是改进生产力的需求，因为大量的样品需要在很短的时间内完成，例如代谢组学分析； 其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求； 第三是在与MS及MS/MS等检测技术联用时，对连接的质量提出了更高的要求。 简而言之，我们需要“更快地得到更好的结果”? UPLC超高效液相色谱 提高色谱柱的效能就能增加仪器的解析度 运用粒径低于2μm的小颗粒无疑是增加效能的好方法 小颗粒不仅要求系统能承受高于目前极限压力（比如6000psi/400bar） 需要更小的系统体积（死体积） 并且需要能适应可能只有几秒峰宽的高速检测器 UPLC色谱柱粒度1.7μm， 传统5μm粒度 UPLC色谱柱长50mm， 传统150-250mm UPLC最佳流量0.2-0.5ml/min， 传统0.8-1ml/min 与传统的高效液相色谱（HPLC）相比，UPLC具有以下优势： 1.高分离度（ultra resolution） 2. 高速度（ultra speed） 3. 灵敏度（sensitivity） UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍 使用更少的样品（更适合含量低的样品，如药物代谢，激素等） 检测时间短（更适合易降解的样品,如农药残留） 消耗更少的溶剂 分离效果更好（更适合复杂体系） 新的自动进样器适合微量多孔板（方便蛋白多肽分析） UPLC应用 质谱的应用 色谱-质谱联用仪已经成为有机化合物常规检测中的必备工具，广泛应用于 环保领域的有机污染物检测 药物研究生产质控的进出口环节 法庭科学中对燃烧爆炸现场调查，残留物检验 石油化工 食品安全(添加剂、塑化剂、农药、抗生素） 竞技体育中兴奋剂检测 Agilent 6500系列精确质量四极杆-飞行时间串联质谱 (Q-TOF) 系统提供了您所需要的轮廓谱分析、鉴定、表征，对定量低分子量化合物和生物分子更具信心。 Q-TOF系统尤其擅长MS和MS/MS分析，对蛋白质、代谢物、杂质检测），不用牺牲图谱采集速率而获得高分辨率。 飞行时间质谱技术（TOF-MS）是一种新型质谱技术,具有质量范围宽、分辨率和质量测量精度较高、灵敏度高、分析速度快的特点 　MS在药物领域的主要应用为药物的定性鉴别、定量分析、结构解析和药物代谢分析。 　MS/MS在药物领域有很多应用。子离子扫描可获得药物主要成分，杂质和其他物质的母离子的定性信息，有助于未知物的鉴别，也可用于肽和蛋白质氨基酸序列的鉴别。 举例1，未知化合物的结构鉴定 高分辨质谱给出精确分子量（小数点后4位） 根据分子量自动计算分子式 从数据库中搜索化合物名称和结构 举例2，中药指纹图谱 中药复杂体系，多组分研究 皂苷等类型无紫外吸收活性物质检测 MS检测器灵敏度更高 无标准品时，各组分的结构鉴定 应用于药材的鉴别，中药提取物和有效部位质量控制，中药复方的质量控制等 人参附子药总离子流图 举例3，药物代谢研究 由于血液样品试样提供量少，基质复杂，在此混合物中分析某种微量成分(通常为(g/mL或ng/mL水平)并加以鉴别，常常是对分析化学家的挑战样品 药物代谢产物复杂 人参皂苷的代谢物研究 举例4，人体代谢物指纹图谱 血清蛋白质分析，疾病的检测 ESI有利于疏水氨基酸残基的离子化，可鉴定多肽数目多，可检测分子量上限高，多肽质量误差低于基质辅助激光解析电离MALDI 举例5，植物生理中蛋白组学的研究 病原菌胁迫的植物蛋白质组学研究 Chen等进行了水稻悬浮细胞表达抗病基因Xa21质膜蛋白质组分析，以鉴定参与抗水稻白叶枯病(X.oryzae pv.Oryzae)早期防御反应的质膜蛋白成分。 质谱鉴定了11个预测在植物防御中起作用的蛋白质，有9个推定的质膜相关蛋白质，H+-ATPase、蛋白质磷酸化酶、过敏反应诱导蛋白(OsHIR1)、prohibitin (OsPHB2)、锌指蛋白(zinc finger)和C2结构域蛋白、USP及热震惊蛋白。 举例6，植物内源性激素的研究 液相色谱-质谱(LC-MS)主要用于不挥发性化合物、极性化合物和热不稳定性化合物的分析测定。 在检测植物内源激素中LC-MS不需要繁琐的衍生步骤，大大减少样品和试剂的损耗以及前处理的时间，同时避免了衍生步骤中副反应或反应歧视造成的损失。 因此，LC-MS更适用于分析检测除乙烯外其他几类植物内源激素，主要种类有生长素类(AUXs)，赤霉素类(GAs)，细胞分裂素类(CTKs)，脱落酸(ABA)，油菜素甾醇，茉莉酸等。 液