2014细胞生物试验程序.ppt

实验方法： 取材（洋葱内表皮） ↓ 卡氏固定液固定 10—15分钟 ↓ 对照2 ┌──水洗 2分钟 →5%三氯醋酸90度15分钟 对│ ↓ ↓ 照│ 水解(1M HCl ) （60℃6分钟） 1 │ ↓ │ 水洗（可省） │ ↓ └─→反应 ( Schiff s) （暗袋中 30分钟） ↓ 洗涤 ( 亚硫酸水) 洗三次，每次1分钟 ↓ 蒸馏水水洗 3次 ↓ 复染（0.5 ％固绿) 1分钟 此步可省略 ↓ 水洗 此步可省略 ↓ 镜检 实验组：细胞核呈紫红色，核仁及细胞质呈绿色 四、课后作业 1、绘DNA在细胞内的分布。 2、简述 作好本实验的关键。 实验六 细 胞 融 合 一、实验原理 细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。 一、实验原理 PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多聚体,它可改变各类细胞的膜结构, 使两细胞相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏散和重组,此时相互接触的两细胞的胞质沟通成为可能,从而造成细胞之间发生融合. PEG介导细胞融合, 其融合效果受以下几种因素的影响:分子量及浓度、pH值、处理时间和温度等. 二、实验材料 鸡红细胞、显微镜、离心机、水浴箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片 50％PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4) 三、实验步骤 (1)取新鲜鸡血以0.85％生理盐水制成10％的悬液。 (2)称取0.5克PEG(MW=4,000)放入试管内，融化后迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀制成50％的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。 (3)取上述10％的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，再加入4ml Hanks液混匀，然后以1,000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。 三、实验步骤 (4)取上述50％PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混匀。待PEG全部加入后静置2分钟左右。此全部过程都要求在37℃水浴内进行。 (5)缓慢滴加5ml Hanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴内静置5分钟。 (6)1000R/MIN离心 8-10MIN弃上清后，取一滴融合后的细胞悬液滴片，染色3MIN后加盖片镜检。 细胞融合过程 四、课后作业 在高倍镜下可以