生工导论总结.docVIP

第一章 绪论 2. 重组DNA(Recombinant DNA)技术（名词解释）: 又称为基因或分子克隆技术，是基因工程的核心技术。是指根据人们的意愿对不同生物的遗传基因进行切割、拼接或重新组合，再转入生物体内产生出人们所期望的产物，或创造出具有新遗传性状的生物类型的一门技术。 生物柴油（名词解释） 是由动物、植物或微生物油脂与小分子醇类经过酯交换反应而得到的脂肪酸类物质，可以代替柴油作为柴油发动机的燃料使用。由于植物或微生物油脂属于可再生资源，因此，生物柴油的生产具有重大意义。 传统能源的日益枯竭需要开发可再生能源 环境保护与汽车工业的发展需要清洁油料 （3）液体燃料的不足已严重威胁到我国的能源与经济安全 4. 生物柴油技术方面存在的问题及解决办法 酶的选择性、寿命与反应时间问题 生物柴油的倾点高、影响低温启动 催化剂的研制 反应的接触界面问题 甘油皂对油品质量的影响 燃烧残留物的微酸性问题 甲醇的聚合问题 残留甲醇与甘油的腐蚀性问题 7. 制药应用 开发制造奇特而贵重的新型药品：利用细胞培养技术或转基因动物来生产蛋白质药物 。 疾病的预防和诊断：单克隆抗体既可用于疾病治疗，又可用于疾病的诊断 。 基因治疗：恶性肿瘤、遗传病、代谢性疾病、传染病等多个治疗方案正在实施中。 人类基因组计划：人类基因组序列图绘制成功。 （1）干扰灵是一种有效的抗病毒、抗肿瘤的治疗制剂。 （2）乙型肝炎疫苗分为： “乙肝血原疫苗” “乙肝基因工程疫苗” 13. 能源应用 解决能源危机：生物能源将是最有希望的新能源之一，而其中又以乙醇最有希望成为新的替代能源。 环境保护：利用这些微生物净化有毒的化合物、降解石油污染、清除有毒气体和恶臭物质、综合利用废水和废渣、达到净化和保护环境的目的。 制造工业原料：化工原料如乙醇、丙酮、丁醇等产品；特殊用途的化工原料，如制造尼龙、香料的原料癸二酸等。 生产贵重金属：利用细菌的浸矿技术对矿石进行提炼金属包括金、银、铜、铀、锰、钼、锌、钻、镍、钡、铊等10多种贵重金属和稀有金属。 第二章 基因工程 2. 重组DNA操作一般步骤：（选择题） （1）获得目的基因； （2）与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子； （3）用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制遗传； （4）对转化子筛选和鉴定； （5）对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或所需要的产物。 3. 获得需要的目的基因常用的方法： （1）直接从生物体中提取总DNA，构建基因文库(gene library)，从中调用目的基因； （2）以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段 （3）利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩增所需要的目的基因片段。 （4）用化学方法合成DNA片段 导入宿主细胞将连接有所需要的DNA的载体导入宿主细胞的常用方法有四种：转化，用质粒作载体所常用的方法。转染，用噬菌体DNA作载体所用的方法转导，用噬菌体作载体所用的方法注射，如果宿主是比较大的动植物细胞则可以用注射方法把重组DNA分子导入。 DNA中既可能包括所需要的DNA片段，不需要的片段互相连接起来的载体分子的聚合体取得所需要的宿主细胞：①遗传学方法， ②免疫学方法和分子杂交方法，分子杂交、基因文库）。 （1）细胞内总DNA的提取分离程序 （2）紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。 （3）基因文库的构建：将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，便构成了该生物的基因文库。 5. 反转录人工合成互补DNA（与上题后半部结合） （1）构建基因文库获取目的基因存在的问题——费时费事 内含子序列 （2）反转录人工合成互补DNA方法的优势：获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。 6. 聚合酶链式反应（PCR）：PCR技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增（包括分离）一段目的基因的技术。每一轮聚合酶链式反应可使目的基因片段增加一倍。30轮循环可获得2的30次方乘以（1.07×109)个基因片段。 加入4种物质： （1）作为模板的DNA序列；（2）与被分离的目的基因两条链各自5’端序列相互补的DNA引物（20个左右碱基的短DNA单链）；（3）TaqDNA聚合酶；（4）dNTP（dATP, dTTP, dGTP和dCTP）。 变性、退火、延伸三步曲 （1）变性：双链DNA解链成为单链DNA （2）退火：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 （3）延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 7. 构建重组质粒和基因克隆 （1）基因重组和克隆操作最重要的工具是限制性内切酶、载体和宿主菌。 （2）微量的目的基因必须经过基因克隆获得大量的拷贝后，才能实现进一步的重组、转化和表达等操作