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学 士 学 位 论 文 论文题目 一种枯草芽孢杆菌发酵培养基的设计与优化 作者姓名 黄 绍 莆 指导教师 郑 新 添 学科(专业) 生 物 技 术 所在学院 生 命 科 学 学 院 提交日期 二零一零年六月 一种枯草芽孢杆菌发酵培养基的设计与优化 院系：生命科学学院 专业：生物技术 学号：2006080214 姓名：黄绍莆 指导教师:郑新添 【摘要】 设计一种以花生壳、玉米芯和豆粕为原料的枯草芽孢杆菌发酵培养基，并通过正交优化实验对该发酵培养基进行优化。结果表明，在培养基中豆粕液浓度为30g/L，花生壳浓度为10 g/L，玉米芯浓度为2 g/L，接种量为5%的情况下，采用此种配比的发酵培养基37℃过夜培养，菌体的生长量达到最大，所测OD600值可达到1.122。 【关键词】 枯草芽孢杆菌；发酵培养基；设计；优化 目录 引言 1 1 材料 2 1.1菌株 2 1.2仪器 2 1.3试剂 2 2方法 2 2.1 枯草芽孢杆菌种子液的制备 2 2.2碳源单因素实验 2 2.3氮源单因素实验 3 2.4 正交优化实验设计 3 2.5 菌体浓度测定 3 3 结果 3 3.1花生壳、玉米芯（碳源）对菌体生长量的影响 3 3.2 豆粕（氮源）对菌体生长量的影响 4 3.3正交实验结果 5 4 讨论 6 致谢语 6 参考文献 6 引言 我国是一个农业大国，花生、玉米、大豆都是比较重要的农作物，产量极大。我国对于这三种原材料的利用与开发正在逐步的发展中，相对来说还有很大的空间，充分的发掘它们的用途具有很大的意义。 玉米是我国三大粮食作物之一，分布极广栽培面积和产量均居世界第二位。,我国玉米总产量2003年约1.16亿t，2004 年约1.30亿t。在进行玉米加工的同时,会有大量的下脚料玉米芯产生。按3kg玉米产lkg玉米芯计算，我国每年大约可产玉米芯0. 4 亿t[1]。玉米芯是玉米果雄脱去籽粒后的果轴11类废弃物质。玉米芯中含有丰富的营养成分，据测定，含糖54.5%，粗蛋白2.6%，粗脂肪0.5%，可溶性无氮物52.9%，粗纤维32%～36%，矿物质1.3%，木质素占25 %，灰分3 2%[2]。由此可见，玉米芯是一种很有利用价值的原料，将其适当加工，就会变废为宝。 花生是世界五大油料作物之一，其生产遍及世界各大洲。近年来花生产量不断提高，加工利用总量增加?，花生的利用途径和范围也逐步拓宽。从我国花生的利用情况看，花生的加工中一直存在着重视其果仁而忽视其皮、壳、饼粕等副产品的利用。花生壳营养成分中干物质占903%，其中粗蛋白质48%～72%，粗脂肪11%，粗纤维657%～793%，半纤维素101%，可溶性碳水化合物为106%～212%，粗灰分19%～46%，含钙024%～027%，磷008%～009%[3]。 除少量作为粗饲料外，大量的花生壳被烧掉或白白扔掉，没有充分合理的利用，浪费了资源。据不完全统计，我国年副产花生壳超过500万吨,数量还在猛增，面对这一数量庞大的资源，如何充分利用花生壳，加强其综合开发的力度，对增加经济效益和保护环境有重要意义。分为蛋白质40%～4%，脂肪1%～～。 1.2仪器 （1）电子分析天平：FA1004，上海恒平科学仪器有限公司； （2）低温冰箱：BCD-218（KK227-58TI），西华家用电器有限公司； （3）不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器：YXQ-SG46-280S，上海博迅实业有限公司医疗设备厂； （4）超净工作台：SW-CJ-ID型，苏州净化设备有限公司； （5）紫外可见分光光度计：WFZ UV-2000； （6）恒温振荡器：SH2-82，国华企业； （7）生化培养箱：LRH-250，上海-恒科技有限公司； （8）移液枪：eppendorf，Research，规格1ml-200μl； 1.3试剂 1.3.1 实验材料 （1）花生壳、玉米芯：从龙岩市东肖镇市场购买花生和玉米，将花生壳和玉米芯留下。然后将花生壳和玉米芯烘干后粉碎，用40目筛子筛选得较小颗粒原料。 （2）豆粕：由东肖镇上的一家豆粕加工厂购买获得，用40目筛子筛选。 1.3.2 种子培养基 葡萄糖20g 蛋白胨15g 氯化钠5g 牛肉膏0.5g 琼脂 20g 加蒸馏水至1L溶解，用NaOH将pH值调至6.8-7.0。 1.3.3基础发酵培养基 葡萄糖20g 蛋白胨15g 氯化钠5g 牛肉膏0.5g 加蒸馏水至1L溶解，用NaOH将pH值调至6.8-7.0。 2方法 2.1 枯草芽孢杆菌种子液的制备 (1)配制好种子培养基，121℃高压蒸汽灭菌20min，待温度降低后倒平板。恒温培养箱培养24h后观察是否有杂菌污染，若未