中华马氏钳蝎昆虫神经毒素BmK I6的结晶和初步晶体学研究.pdfVIP

中华马氏钳蝎昆虫神经毒素BmK I6 的 结晶和初步晶体学研究 管荣津 王 淼 刘新奇 王大成* (中国科学院生物物理研究所 北京 100101. * 联系人, wdc@pewdc.ibp.ac.cn) 摘要 从中华马氏钳蝎蝎毒中分离纯化了一种兴奋型昆虫神经毒素 BmK 16 以硫酸铵为沉淀 剂 在不同pH 值下得到了它的两种晶型 其中有一种是单晶 在Mar Research 345 面探测器上 进行了衍射数据的收集 其衍射能力可达 0.28 nm. 经 MOSFLM 6.0 软件处理 确定其属于 C2 空间群 它的晶胞参数为: a = 4.65 nm b = 8.52 nm c = 3.26 nm a = g = 90° b = 110.5° . 根据 分子量和晶胞体积估算 每个不对称单位含两个分子. 386 简 报 第45 卷 第4 期 2000 年2 月 科学通报 关键词 中华马氏钳蝎 昆虫神经毒素 晶体生长 初步晶体学 蝎毒主要由一些高度选择性地作用于动物神经系统的毒素组成 这些毒素具有显著的种 属专一性 可以分为分别对哺乳动物 昆虫及甲壳动物作用的3 种类型. 根据分子量的大小 蝎神经毒素又可分为长链毒素和短链毒素两大类 前者由 60 70 个氨基酸组成 专一性地 + 2+ + 作用于Na 和 Ca 通道 而后者则是 30 40 个残基的小肽 主要作用于 K , Cl 通道. 根据 [1] 毒理效应的不同 长链昆虫毒素又可分为兴奋型和抑制型两种 兴奋型昆虫毒素注入蝇幼 虫体内后诱发收缩性瘫痪 而抑制型昆虫毒素则引起松软性瘫痪. 从一级结构来看 抑制型 昆虫毒素和哺乳动物毒素同源性很高 而兴奋型昆虫毒素和哺乳动物毒素相差却很大 而且 它的二硫键排布方式和抑制型昆虫毒素以及哺乳动物毒素有着显著的差异 所以研究兴奋型 昆虫毒素的三维结构及其结构与功能的关系 不仅可以帮助我们了解它与钠通道的作用机理 和其发挥生物活性的结构基础 而且对于研究昆虫和哺乳动物钠通道同源相关性以及毒素和 离子通道的分子进化也非常有意义. 蝎昆虫毒素不仅是研究离子通道的良好工具 同时 它 还具有鲜明的应用价值. 由于它的种属专一性和高效抗昆虫活性 使它在研究生物杀虫剂以 [2] 及转基因植物上有着重要的地位 如 1990 年英国的 Stewart 等人 在杆状病毒中重组了昆虫 毒素AaH IT 大大增强了病毒对昆虫的杀伤能力. 另外 在研究蝎昆虫毒素结构与功能关系 [3, 4] 的基础上 通过蛋白质工程开发新型高效杀虫剂 有着非常美好的前景 . 目前对哺乳动物毒素三维结构的研究已经比较多了 但对昆虫毒素结构的研究却很少. 研 究昆虫毒素三维结构的最大障碍是难以得到足够量的纯度高 构象均一的昆虫毒素样品. 不 [5] 久前 Oren 等人 建立了昆虫毒素 Bj-xtrIT 的基因表达体系并纯化了 Bj-xtrIT 用它培养晶体 解出了它的三维结构. 但是从天然产物中分离纯化的昆虫毒素 至今尚无晶体结构报道. 另 外