第11章固相膜免疫技术解释.pptVIP

重点提示 原理 技术要点 方法学评价 原 理 Dot-ELISA的实验原理与常规的ELISA相同，不同之处在于Dot-ELISA所用载体为NC膜。其原理为样品中的抗体或抗原与预先包被在NC膜上的抗原或抗体发生抗原抗体反应，然后再加入相应的酶标二抗进行反应，反应结束后，通过酶催化底物，形成有色的沉淀物，产生显色反应，根据染色条带或斑点的有无或深浅，对抗体或抗原进行检测。阳性者即可在膜上出现肉眼可见的染色条带或斑点。 图11-4 Dot-ELISA示意图 技术要点 抗原包被：优化抗原的浓度。 抗原抗体反应：滴加样品血清，待检抗体与NC膜上抗原结合。 确定酶结合物最佳稀释度：一般以阴性样品不显色而阳性样品显色最强的酶结合物稀释度为最佳稀释度。 显色反应：在盐酸联苯胺和过氧化氢为底物时，溶液pH值应在5.8～6.0，此时反应最灵敏。 方法学评价 优点： 1.吸附蛋白能力强 2.可同时检测多种抗体 3.其它：实验和结果判断不需特殊设备条件，结果可长期保存 第五节 免疫印迹试验 重点提示 原理 技术要点 方法学评价 原 理 技术要点 抗原印迹与包被 抗原抗体反应 检测 抗原等蛋白样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，电转至硝酸纤维素膜上 放射自显影法 底物化学发光法 底物荧光法和底物显色法 方法学评价 特异性强， 用于病原体 确认 1 3 同时检测多种抗体 4 膜条可重复