Mx3000P操作说明.pdf

Stratagene Mx3000p 操作手册 Stratagene Mx3000P 荧光定量 PCR 仪 应 用 手 册 上海吉泰生物科技有限公司 2005-09-08 上海吉泰生物科技有限公司 PCR 反应原理 目 录 第一章 聚合酶链反应原理 1 第二章 荧光定量PCR技术原理 5 第三章 样本及标准品处理 9 第四章 系统主要组成及工作原理 11 第五章 系统的适用范围和性能12 第六章 系统的安装 14 第七章 程序设置及运行 16 第八章 系统的维护及注意事项18 第九章 常见故障及排除20 第十章 吉泰生物科技有限公司售后服务承诺书22 上海吉泰生物科技有限公司 PCR 反应原理 第一章 聚合酶链式反应原理 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是 80 年代中期发展起来的体 外核酸扩增技术。 它具有特异、灵敏度高、产率高、 快速、 简便、重复性好、易 自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA 片段在数小 时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚 至一个细胞中扩增出足量的 DNA 供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到 的事情，用 PCR 几小时便可完成。PCR 技术是生物医学领域中的一项革命性创举和 里程碑。 一、 PCR 技术的基本原理 PCR 反应类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡 核苷酸引物。PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ① 模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物 结合，为下轮反应作准备； ② 模板 DNA 与引物的退火(复性)：模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降 至 55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合； ③ 引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在 TaqDNA 聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新 的与模板 DNA 链互补的半保留复制链 重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新 链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4 分钟， 2～3 小时就能将待扩 目的基因扩增放大几百万倍。 1、 PCR 的反应动力学 PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA n 扩增量可用Y ＝(1＋X) 计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每 次的扩增效率，n代表循环次数。理论上平均扩增效率的为 100%，但在实际反应 中扩增效率达不到理论值,这是由于在反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形 式，但随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA 片段不再呈指数增加，而进入 线性增长期或静止期， 即出现“停滞效应” ，这种效应称平台效应。大多数情况 上海吉泰生物科技有限公司 1