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上海洪纪仪器设备有限公司 尼克酸(维生素 PP,又称烟酸)的测定方法 此处介绍微生物法、比色法以及复合维生素制剂中的烟酰胺测定方法(分光光度法) 一、微生物法 1.原理 一种微生物生长必需某一些维生素,Lactobacillus arabinosus 的生长需要尼克酸。尼克酸是 指具有尼克酸生物学活性的吡啶 3-羧酸及其衍生物的总称。它是白色晶体,是维生素中最稳定 的一种,对酸、碱、热、光及弱氧化剂都很稳定,微溶于冷水,易溶于热水及乙醇。其检出限 为 10ng。 2.适用范围 本方法来源自 AOAC 和国标 GB12395-90。适用于食物及饲料中的尼克酸的检测。 3.仪器 (1) 电热恒温培养箱(37±0.5℃) (2) 无菌室(紫外灯消毒) (3) 电热手提式压力蒸汽消毒器(121℃,高压 30min) (4) 液体快速混合器 (5) 离心机(3000 转,10min) (6) 碱式滴定管 (7) 硬质玻璃试管 4.试剂 所用试剂皆为分析纯;所用水皆为蒸馏水 4.1 标准溶液的配制 (1) 尼克酸标准储备液(0.1mg/ml):准确称取 50.0mg 已干燥恒重并储于五氧化二磷干燥器 中的尼克酸标准,以 25%乙醇溶液溶解并定容至 500ml,于冰箱中保存。 (2) 尼克酸标准中间液(1ug/m):吸取 1.00ml 尼克酸标准储备液,置于 100ml 容量瓶中, 用 25%乙醇溶液定容,混匀,于冰箱中保存。 (3) 尼克酸标准工作液(0.1ug/m):临用时吸取 5.00ml尼克酸标准中间液,置于 50ml 容量 瓶中,用水定容,混匀。 4.2 其它试剂的配制 (1) 0.5mol/L 硫酸:于 2000ml 烧杯中加入 700ml 水,加入28ml H2SO4,用水稀释至 1000ml。 (2) 10mol/L 氢氧化钠:溶 200g NaOH 于水中,稀释至 500ml。 (3) 0.1mol/L 氢氧化钠:,取 10ml 10mol/L NaOH,用水稀释至 1000ml。 (4) 0.04%溴甲酚绿溶液,称取0.1g 溴甲酚绿于研钵中,加 1.4ml 0.1mol/L NaOH 研磨,加 少许水继续研磨,直至完全溶解,用水稀释到 250ml。 (5) 酪蛋白(sigma 公司):称取50g 不含维生素的酪蛋白,加 200ml (3mol/L)盐酸,121℃ 磅压力下水解 6 小时,将水解物转移至蒸发皿内,在水浴上蒸发至膏状。加 200ml 水使之溶解 后再蒸发至膏状,反复 3 次,以除去盐酸。 注意:*酸解酪蛋白是为了去除酪蛋白中的维生素,确保培养基中不含代测的尼克酸,但酸解并 不一定彻底,因此选用不含维生素的酪蛋白。 *水浴蒸发时不可蒸干或使之焦糊,若溶液被蒸干,水解液所含营养物已被破坏 用 10mol/L 氢氧化钠调节 PH 值至 3.5,以溴酚蓝作外指示剂。加 20g 活性炭,振摇,过滤,反 复操作至滤液无色。滤液加水稀释至 500ml,加少许甲苯置冰箱中保存。 *注意:活性炭不能在溶液中太久,否则容易破坏酪蛋白的营养成分 地址:上海市普陀区桐柏路芙蓉园 18 号 403 邮编:200062 电话:(021 传真:(021 网址: 上海洪纪仪器设备有限公司 (6) 溴酚蓝:称取 0.1g 溴酚蓝,用 1+4 乙醇溶解后,再加乙醇稀释至 100ml。 (7) 甲苯 (8) 4mol/L 盐酸溶液,V+V=1+4 (9) 5mol/L 生理盐水:取 9gNaCl 溶于 1000ml 水中。 (10) 胱氨酸、色氨酸溶液:称取 4gL-胱氨酸和 1gL-色氨酸溶于 800ml 水中,加热至 70~80℃, 逐滴加入 20%盐酸,不断搅拌,直至完全溶解为止。冷至室温,加水稀释至 1000ml。加少许甲 苯于冰箱中保存。 (11) 腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶溶液:称取硫酸腺嘌呤,盐酸鸟嘌呤及尿嘧啶各 0.1g,加 75ml 水和 2ml 浓盐酸,然后加热使其完全溶解,冷却,若有沉淀产生,加浓盐酸数滴,再加热。如 此反复,直至冷却后无沉淀产生为止。用水稀释至 100ml。加少许甲苯于冰箱中保存。 (12) D-泛酸钙、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇溶液:称取 D-泛酸钙、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆

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