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仪器分析复习题 1.色谱法定性和定量的依据是什么？ 定性依据：色谱峰的保留值；定量依据：色谱峰的面积或峰高。 2.什么叫程序升温？它有什么作用？ 色谱中的程序升温是指当进样之后，由于温度的影响，两个相邻的色谱峰不能够完全的分开， 而引起的脱尾现象时候采取的一种将缝分离的方法。这种方法是通过温度的控制将缝分开。一般情 况下是从进样之后进行该程序到升温结束色谱缝分离。 作用：程序升温可以使峰变瘦,提高柱效，使分离度更好，程序升温，使全部物质都能够出峰。 3.什么叫梯度洗脱？它有什么优点？ 又称为梯度淋洗或程序洗提。梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将层析 柱上不同的组分洗脱出来的方法。 梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型可以得到改善，很少拖尾；4.增加 灵敏度。但有时引起基线漂移。 4.为什么用分离度R作为色谱柱的总分离效能指标？ 分离度R：相邻两组份色谱峰保留值之差与两个组份色谱峰的宽度总和之半的比值。 根据塔板理论，有效理论塔板数n有效是衡量柱效能的指标，表示组分在柱内进行分配的次数，但 样品中各组分，特别是难分离物质对（即物理常数相近，结构类似的相邻组分）在一根柱内能否得 到分离，取决于各组分在固定相中分配系数的差异，也就是取决于固定相的选择性，而不是由分配 次数的多少来确定。因而柱效能不能说明难分离物质对的实际分离效果，而选择性却无法说明柱效 率的高低。因此，必须引入一个既能反映柱效能，又能反映柱选择性的指标，作为色谱柱的总分离 效能指标，来判断难分离物质对在柱中的实际分离情况。这一指标就是分离度R。 5.根据速率理论，色谱柱的板高H 由哪些因素决定？试给出最佳流动相流速U最佳和最小板高H最 小的计算公式。 根据范第姆特方程H=A+B/u+Cu可知，板高H 由涡流扩散项A、分子扩散项B/u、和传质阻力 1/2 1/2 项Cu等因素的影响。U最佳= （B/C） ,Hmin=A+2(BC) 。A、B、C常数分别为涡流扩散系数、 分子纵向扩散系数和传质阻力项系数。 6.以固定相和流动相的极性及组分出峰顺序说明什么是正相色谱和反相色谱。 在液一液分配色谱中，对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极 性，称为正相分配色谱(色谱柱称为正相柱)，适合极性化合物的分离，极性小的组分先流出，极性大 的组分后流出。反之流动相的极性大于固定液的极性时，称为反相分配色谱(色谱柱称为反相柱)，适 用于非极性化合物的分离，出峰顺序与正相分配色谱相反。 7.试比较高效液相色谱法与气相色谱法这两种分析法之间的异同，并做简要说明。 理论和技术上有许多共同之处，如： 1）它们都是以复杂混合物分离为目的的仪器分析方法。色谱分离的操作和数据处理均可实现自动化， 也都可与其他分析仪器如光谱、质谱等联用，成为研究混合物组成的有力手段。 2）二者的色谱分离理论是一致的，气相色谱中的分配平衡、塔板理论、速率理论等，均可应用于液 相色谱，仪器结构和操作技9术也十分相似。 3）分析流程及定性、定量的原理和方法完全一样。液相色谱也是根据保留值定性、根据峰高或峰面 积定量。 二者又有差别： 1）高效液相色谱使用范围比气相色谱广。液相色谱不仅可分析大多数用气相色谱能分析的物质，也 可用于分析高沸点、大分子量、高极性、热不稳定的物质，高分子化合物、生物活性物质、无机物 1 等均可用高效液相色谱分析。 2）二者的流动相的不同。气相色谱的流动相是惰性的，对组分没有亲和力，仅起运载作用。而液相 色谱的流动相对组分有一定的亲和力，它会与固定相展开对组分溶解的激烈竞争，流动和组分之间 的作用力，相当于增加了一个控制和改进分离状况的参数。另外，可用做液相色谱流动相的化合物 多，选择余地大，并可调节流动相的极性、离子强度或PH，为选择最佳分离条件提供了极大的方便。 3）高效液相色谱仪与气相色谱仪在原理和结构上也有一些差别。如液体黏度比气体大100倍，密度 大约大1000倍。由于流动相黏度高为了得到合理的柱内线速度及较短的分析时间，高效液相色谱仪 有高压输液泵。液相色谱中采用更低的柱温，一般可在室温下进行。大多数检测器的检测原理和结 构与气相色谱也不同。PHLC检测器的结构要复杂些，灵敏度低些，检测技术赶不上气相色谱的。 从总体上看，PHLC较气相色谱