GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书.pdfVIP

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10014.2 v.A GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过测定纯化的可溶性完整线粒体样品 中的细胞色素C 氧化酶的活性，即采用比色法测定受到细胞色素 C 氧化酶催化的氧化反应的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、 昆虫等）细胞色素C 氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。 技术背景 细胞色素 C 氧化酶（Cytochrome c oxidase ）存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞 提供能量。作为线粒体外膜功能的生物标记，通过线粒体膜上的酶活性变化，来衡量线粒体外膜的完整性： 基于还原型细胞色素 C （reduced cytochrome c ）转化为氧化型细胞色素C （oxidized cytochrome c ）的变化 （550nm 波长），来定量测定细胞色素C 氧化酶的活性。细胞色素 C 氧化酶反应系统为： 2+ + 细胞色素C氧化酶 3+ + 4 cytochromec +8H +O ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→4 cytochromec +2H O +4H 2 2 还原型 氧化型 (高吸收峰) (低吸收峰) 产品内容 GENMED 缓冲液（Reagent A ） 毫升 GENMED 反应液（Reagent B ） 毫升 GENMED 稀释液（Reagent C ） 毫升 GENMED 稳定液（Reagent D ） 微升 产品说明书 1 份 保存方式 GENMED 缓冲液（Reagent A ）和GENMED 稀释液（Reagent C ）保存在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃ 冰箱里；GENMED 反应液（Reagent B ）避免光照；有效保证12月 用户自备 1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器 石英比色杯：用于比色的容器 分光光度仪：用于比色分析 实验步骤 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 GENMED 反应液（Reagent B）置入冰槽里融化，然后移出 100 1 微升到新的1.5毫升离心管，加入 微升 GENMED 稳定液（Reagent D），轻柔混匀后，室温下避光静置 至少 15 分钟（可见颜色变化），置于冰槽里，标记为 GENMED 反应工作液 （注意： 见注意事项 4 ），放在暗 室里备用。然后进行下列操作。 一、 测读准备 1． 准备好含有细胞色素 C 氧化酶的样品（例如纯化的线粒体样品等），置于冰槽里融化 2． 设定好分光光度仪：温度25℃，波长550nm，时延5秒，间隔10秒，测读6次（共60 秒），并置零或 设置0秒和60 秒各测读1次 二、 背景对照测定 3． 移取 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的 1 毫升比色杯 4． 加入 微升 GENMED 稀释液（Reagent C） 5． 放入分光光度