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SulfoLink Coupling Resin 货号：S4530 规格：5ml/25ml 保存：2℃-8℃ 产品介绍 SulfoLink Coupling Resin 是一类预活化树脂，可以通过与巯基或者氨基的反应实现抗原 的固定化，进而对免疫血清中的抗体进行纯化。SulfoLink Coupling Resin 可以得到高效 价的目标抗体，是多克隆抗体生产中不可缺少的纯化介质。 产品性能： 性能 指标 基质 4%琼脂糖微球 配体 碘乙酸 载量 ＞3mg 粒径(μm) 45-165 最大流速 0.1MPa pH 稳定范围 储存缓冲液 1M NaCl 纯化流程 SulfoLink Coupling Resin 针对巯基和氨基的偶联条件有所差异，对于含有巯基抗原偶联 请参考1.1 流程，对于含有氨基抗原偶联请参考1.2 流程。 1.1 含巯基抗原的偶联流程 1.1.1 缓冲液准备 所用水和Buffer 在使用之前建议用0.22 μm 或0.45 μm 滤膜过滤。 偶联液：50 mMTris，5 mMEDTA-Na，pH 8.5 封闭液：50 mMTris，5 mMEDTA-Na，50 mML-半胱氨酸，pH 8.5 保护液：20 mM 磷酸盐缓冲液，20% 乙醇，pH 8.0 结合/洗杂液： 20 mM 磷酸盐缓冲液，pH 8.0 洗脱液：100 mM 甘氨酸，pH 2.5-3.0 中和液：1 M Tris-HCl， pH 8.5 1.1.2 抗原准备 抗原样品使用前务必确保其巯基处于还原状态 （可以使用Ellman’sReagent 检测自由巯基 的含量）。如果巯基已经氧化，必须对抗原进行还原，一般推荐使用还原剂TCEP （Tris(2-carboxyethyl) phosphine），TCEP 溶液很稳定，可以选择性的、高效的打开抗 原中的二硫键，并且不影响抗原与树脂的偶联反应，每毫克抗原中TCEP 的添加量不超过12mg， 需要自己进行优化。如果使用DTT 等含有巯基的还原剂，处理完样品必须要将还原剂去除， 否则会影响抗原与树脂的偶联效率。使用偶联液溶解抗原，制备成终浓度为1-3mg/ml 的抗 原溶液。建议该溶液现用现配，储存时间过长会影响偶联效果。 1.1.3 抗原偶联 1) 取适量的SulfoLink Coupling Resin，加入合适的重力柱中，靠重力流干保护液， 用3倍柱体积的偶联液平衡树脂，待偶联液流干，再加入3 倍柱体积的偶联液，重复操 作2遍。共使用9 倍柱体积的偶联液。 2) 关闭柱子的下端出口，加入等体积的含巯基的抗原，混匀，取出至于合适的离心管 中，置于28℃震荡孵育30min。 注：确保树脂充分悬浮起来，否则将大大影响偶联效率。 3) 将上述反应体系取出，转移至重力柱中，流干其中溶液，并收集流出，再用3 倍柱 体积的偶联液清洗树脂，合并两次流出。 注：如有需要，可以使用Ellman’sReagent 检测其中巯基含量，得出抗原残留量，从而计 算偶联效率。 4) 关闭柱子的下端出口，加入等体积的封闭液，混匀，转移至合适的离心管中，置于 28℃震荡孵育30