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山东大学 期末考试知识点复习 第七章 超临界流体色谱与其他色谱分析法 1．超临界流体的基本特征 超临界流体是指在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态，具有气体的低黏度、液体的高密度以及介于气、液之间的较高的扩散系数等特征。 2．与气相和液相色谱相比，超临界流体色谱的主要特点 与气相色谱相比可处理高沸点、不挥发试样，与高效液相色谱相比则流速快具有更高的柱效和分离效率。三种色谱方法在应用方面具有较好的互补性。 3．在超临界色谱(SFC)中，流体压力对分离的影响与压力效应 在超临界色谱中，通过调节流动相的压力，可改变流动相的密度，使组分在两相间的分配比发生变化，从而可调整组分的保留值，提高分离效果，这类似于气相色谱中的程序升温和液相色谱中的梯度淋洗的作用。 在SFC中压力变化对容量因子产生显著影响，超流体的密度随压力增加而增加，而密度增加则溶剂效率提高，淋洗时间缩短，这种现象称为压力效应。 在超临界色谱中，分离柱的柱压降比较大(比毛细管色谱大30倍)，对分离产生较大的影响，即在分离柱前端与柱末端，组分的分配系数相差很大，产生压力效应。超临界流体的密度受压力影响，在临界压力处最大，超过该点影响小，当超过临界压力的20％，柱压降对分离的影响小。 4．在超临界色谱中，对固定相有哪些要求 在超临界色谱中，超临界流体对分离柱填料的萃取作用比较大，固定相必须具有耐萃取特性，可以使用固体吸附剂(硅胶)作为填充柱填料，或采用液相色谱中的键合固定相。 5．超临界流体色谱的流动相 缺点是极性太弱，可加入少量甲醇等改性。 6．超临界流体色谱特别适合什么类型的试样分析 由于超临界流体色谱的分离特性及在使用检测器方面具有更大的灵活性，使不能转化为气相、热不稳定化合物等气相色谱无法分析的试样，及不具有任何活性官能团，无法检测也不能用液相色谱分析的试样，均可以方便地采用SFC分析，如天然物质、药物活性物质、食品、农药、表面活性剂、高聚物、炸药及原油等。 7．激光色谱的基本原理 激光色谱是指以激光的辐射压力为色谱分离的驱动力，将待分离组分(或粒子)按几何尺寸的大小分离的技术。激光色谱是建立在“激光捕集”的原理基础之上的分离技术。 待分离的粒子随流动相以一定的流速流过一个内径为200μm的毛细管时，用适当方法将一定功率的激光束聚焦于毛细管的出口处，光束与毛细管同轴并与流动相流动方向相反。这时，粒子受到两种方向相反的力共同作用，即流动相的推动f推和激光束的辐射压力f辐。由于待分离粒子的折光指数大于溶剂的折光指数，粒子受辐射压力的作用聚焦在激光束的中心线上。当f辐f推时，粒子运动方向发生反转并获得一定的加速度，沿激光束的中心线运动并通过激光束的“光腰”，然后由于受到流动相的阻力而逐渐减速，当f辐=f推时，离子在该处停留。由于粒子所受到的作用力大小与自身的几何尺寸大小和特性有关，不同大小的粒子停留的位置不同，尺寸大的粒子受到的辐射压力大，所以的粒子尺寸越大，离激光光源位置越远，从而实现分离。 8．激光色谱主要特点 (1)进样简单，可以将样品溶液滴加到流动相中，也可以事先加到流动相中，样品随流动相一起流经毛细管而分离。 (2)优化分离条件容易 只要改变激光束的聚焦条件就可以控制粒子的分离效果。激光色谱可以通过适当地延长测定时间，比较准确地测定分析物粒子的位置，以提高分离度。而其他色谱技术中，因为样品在色谱柱中停留时间越长，各种扩散现象越严重，不利于分离。 (3)不需要用标准物质对照定性 光色谱的定性依据是待分离粒子的尺寸大小和折光指数，只要预先知道分析物粒子的尺寸大小和折光指数，就可以通过计算来确定粒子的位置而定性。 (4)可以随时检测 分离的粒子可以随时采用适当的检测手段进行检测，如配有显微镜的摄像机纪录，其检测效率是100％，而其他色谱的检测效率则远小于100％； (5)可同时实现分离和富集 改变激光器的输出功率就可以将粒子按几何尺寸大小收集，提高其浓度，达到富集的目的，而不需增加额外仪器和时间就可以同时完成分离和富集，而其他色谱技术中经分离后的样品溶液都呈被稀释状态。 (6)可以更有效地分离单个“粒子”或“大分子”，如生物细胞和生物大分子，而其他色谱在这方面往往无能为力。 (7)只要中断激光束就可以恢复样品的初始浓度，这对某些经色谱分离后对原样品溶液进行后续研究非常重要，而其他色谱则无法达到此要求。 (8)可以进行“原位”反应或对粒子的性质进行各方面的研究 由于粒子被??光捕集在确定位置，并可根据需要确定停留时间，故可方便地对粒子进行化学反应或其他研究。 (9)色谱柱的尺寸可以减小至微米级，为微米区域内的化学