颇尔超滤经典培训资料PPT.ppt

Pall Gelman Laboratory 议程 过滤类型 离心浓缩装置 Membranes and MWCO 切向流装置 Devices 过滤类型 过滤尺寸范围 直流过滤模式 不同处理量的直流过滤器系列: 切向流过滤模式 Ultrafiltration Spin Filters Tangential Flow Filtration 截留分子量 (MWCO) 一种超滤膜对大小已知的分子化合物的截留性质 Nanosep的主要应用范围 核酸片段的分离和纯化 PCR中的应用 蛋白的纯化：最为常用，包括抗体纯化 质谱样品的制备：严格除盐 一、核酸片段的纯化 去除同位素标记中的游离核苷酸：30K 酶切反应用DNA纯化和换buffer：双酶切 琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶回收核酸片段： Nanosep MF＋Nanosep 同位素标记反应基本组成 DNA模板 Buffer 除标记核苷酸外的其他三种核苷酸 同位素标记的核苷酸 酶 随即引物标记法示意图 去除同位素标记中的游离核苷酸 琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶回收核酸片段 NanosepTM在胶回收的作用 Nanosep MF 作用：去除胶（大分子） Nanosep作用：去除buffer和水 二、 NanosepTM在PCR中的应用 PCR中的应用 PCR模板的纯化：去除buffer PCR引物的纯化：3K，10K PCR产物的纯化：30K，100K 三、NanosepTM在蛋白浓缩中的应用 四、NanosepTM在蛋白去盐和缓冲液中的应用 超滤膜包的内部结构 问题： 1、张老师向你咨询可否将其实验室已知的10K和15K的两种蛋白通过超滤的方法分开，你认为可行吗？ 2、李老师想通过超滤的方法将其30K的除盐、浓缩，你建议其采用多大分子截留量的超滤膜？ 3、某用户计划用超滤方法去除10K蛋白溶液中的细胞碎片等（100K）大分子，你将如何向客户推荐相关产品？ Pall实验室产品的主要超滤膜包 MINIMATE：可线性放大 谢谢! 胶回收核酸操作示意图 稀蛋白溶液种浓缩蛋白 超滤可以在温和条件下进行,没有大的生物活性的损失。特别应用于处理含有抗体,酶,生长因子等等的蛋白质稀溶液 依靠样品的体积选择合适的膜 操作步骤 把蛋白质稀溶液置于具有合适MWCO值的柱子的样品槽 离心（1.0mg/ml的溶液14000g转速下离心至体积为10到60ul 浓缩之后,蛋白质样品可以从截留室中吸取出来. 如果用小体积缓冲液用来冲洗膜表面收集截留的蛋白样品能够得到更高的产率. 钝化方法增加蛋白回收 钝化溶液 ?1％牛血清白蛋白磷酸缓冲液溶液 ?5％十二烷基磺酸钠蒸馏水水溶液 ?5％Tween-20非离子活性剂蒸馏水溶液 ?5％Triton-X 蒸馏水溶液 ?5％聚乙二醇化合物蒸馏水溶液 ?1％免疫球蛋白IgG磷酸缓冲液溶液 100% 0.06 mM 4 99.99% 1.25 mM 3 99.75% 25 mM 2 95% 500mM 1 盐去除百分比 离心后盐浓度 离心次数 去盐估算 网状通道Screen channel · 适用于低粘稠度溶液的浓缩、纯化。 · 因轻微的漩流降低了膜包的堵塞。 开放通道Open Channel · 适用于高粘稠度溶液的浓缩、纯化。 · 最大限度的减少细胞破碎，适宜完整性细胞、病毒的纯化。 ? 过滤介质： 改性的聚醚砜膜Omega ? 过滤面积： 50cm2 ? 初始体积： 25ml－500ml ? 浓缩体积： 10ml ULTRASETTE ? 过滤介质： 改性的聚醚砜膜Omega ? 过滤面积： 700-836cm2 ? 初始体积： 200ml－5000ml ? 浓缩体积： 40-50ml 膜包的清洗与保存 膜包的保存 新膜包：微量甘油＋叠氮化钠 旧膜包： 二周: 0.1- 0.3 N NaOH 二周: 0.1-0.3 N NaOH ＋0.05% NaN3 使用前 膜包的清洗 保存液的去除 关闭滤出阀，DI 或DFI 冲洗自回流液口排放， 使达到回流液冲洗量 开放滤出阀，回流液循环，适当关闭回流阀使 回流压力 近似进液压力，使达到滤出液冲洗量 膜包的清洗 使用前 初始水通量的测定 新膜包第一次使用，必须首先进行初始水通量测定 开放滤出阀，缓冲液回流循环，适当关闭回流阀， 记录：系统型号＋膜包型号＋系列号 进料口压力 回流口压力 滤出口压力 滤出速度