第十章 吸光光度法学习.pptVIP

Sec.1 物质对光的选择性吸收Sec.2 光的吸收定律Sec.3 吸光光度法的仪器Sec.4 吸光光度法分析条件的选择Sec.5 吸光光度法的应用 Sec.1 物质对光的选择性吸收 光的波粒二象性 单色光、复合光、光的互补 二、 物质对光的选择性吸收 物质对光的吸收 物质对光的选择吸收 定性分析与定量分析的基础 Sec.2 光的吸收定律 吸光度 与透射率 吸光率和transmittance 吸光系数 吸收率 桑德尔灵敏度 定义：当光度仪器的检测极限为A＝0.001时，单位截面积光程内所能建处的吸光物质的最低质量。ug/cm2 例1.利用邻二氮菲光度法测定Fe.已知溶液中亚铁为500ug/L，液层厚度2cm，在508nm处测得透射比为0.645，计算吸光系数，摩尔吸光系数和桑德尔灵敏度。 偏离朗伯－比尔定律的原因 非单色光引起的对吸光定律的偏离 Sec.3 吸光光度法的仪器 单波长单光束分光光度计 单波长双光束分光光度计 仪器实物 仪器实物1 Sec.4 吸光光度法分析条件的选择 一、显色反应及其条件的选择 （一）显色反应及显色剂的基本要求： 1.选择性好 2.灵敏度高 3.对比度要大，波长相差60nm以上 4.稳定，组成恒定 5.显色反应条件易于控制 1.显色剂的用量 2.酸度的选择 酸度的选择 3.温度的选择 二.仪器测量条件的选择 测量条件的选择 3.参比液的选择 Sec.5 吸光光度法的应用 单组分的测定 3.示差光度法 示差法的误差 例题 示差法提高准确度的实质 4.络合物的组成及稳定常数的测定 B 等摩尔连续变化法 条件稳定常数的测定 弱酸弱碱离解常数的测定 双波长分光光度法 1.测量波长的选择 无干扰，选择 ?max 有干扰 A ? A ? 2.待测溶液吸光度的选择 控制 A = 0.15 ~ 1 T = 70 % ~ 10% 方法 选择 C 选择 b 1、非单色光影响小 2、灵敏度高 原则： 扣除非待测组分的吸收 以显色反应为例进行讨论 M + R = M-R ?max 试液 显色剂 溶剂 吸光物质 参比液组成 无吸收 无吸收 光学透明 溶剂 基质吸收 无吸收 吸收 不加显色剂的试液 无吸收 吸收 吸收 显色剂 基质吸收 吸收 吸收 吸收 显色剂 + 试液 + 待测组分的掩蔽剂 若欲测 M-R 的吸收 ?max A （样） = A （待测吸光物质） + A （干扰）+ A （池） A （参比） = A （干扰）+ A （池） 微量组分的测定 1.单组分的测定 2.多组分的测定 介绍一种 解联立方程法 A ? X Y ?1 ?2 原则：根据吸光度加合性 解联立方程，可求得Cx, Cy ? 为物质的特征参数，可通过配制标准溶液测得。 请设计一个测定两组分的浓度的实验方案 A Cs(x) 纯物质或共存物质不干扰 微量铁的测定 氨基酸的测定 邻二氮菲法 茚三酮法 蛋白质的测定 考马斯亮蓝法 总磷的测定 磷钼蓝法 海水中营养盐的测定 返回 方法 常规法 以空白溶剂为参比 示差法 以浓度为 Cs 的标准溶液为参比 A △C △Cx A′ （Cx Cs） 适宜 高 浓度的测定 思考：（Cx ? Cs）时情况怎样 ？ 方法 定量原理 相对误差 常规法 示差法 ∴ Tr Tx ∵ I0 Is 有 结论：示差法提高了准确度 例题 已知 dT = 0.01, 样品Tx = 2.00 %, 标准 Ts = 10.0 % 示差法 常规法误差 示差法误差 已知 dT = 0.01, 样品Tx = 2.00 %, 标准 Ts = 5.00 % 常规法 Tx T 0 5 10 50 100 落在测量误差较 大 的范围 示差法 T 0 5 10 50 100 Tr Ts Ts 落在测量误差较 小 的范围 结论：示差法通过提高测量的准确度提高了方法的准确度 A.摩尔比法测络合比（饱和法） M + nR = MRn CM, 固定； CR, 从 0 开始增大 CMRn CR 在特定波长测定 A CR/CM n M + nR = MRn 保持 CM+ CR = 常数 CM / C 从 0 →1连续改变 在特定波长测定A作图 0 0.5 1.0 A CM / C 0.33 n = 1, CM / C =0.5 n = 2, CM / C =0.33 0 0.5 1.0 A CM / C A′ A′ A 由于络合物离解引起 离解度 MR = R + M 总浓度 C 平衡浓度 C(1-a) Ca Ca 将 代入上式便可求出络合物的条件稳定常数 HR = H+