猪伪狂犬病病毒疫苗株与野毒株鉴别PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

• 166 • 疾病防治 中国畜牧兽医 2011 年第 38 卷第 12 期 猪伪狂犬病病毒疫苗株与野毒株鉴别 PCR 检测方法 的建立及初步应用 董浩1 ，吴博2.4 ，张建莹3 ，胡桂学4 O. 吉林农业大学生命科学学院，吉林长春 130118; 2. 黑龙江省兽医研究所，黑龙江齐齐哈尔 161006 ， 3. 深圳出入境检验检疫局，广东深圳 518067 ;4. 吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118) 摘要:本试验根据疫苗株缺失 gE 基因、野毒株和疫苗株均有 gB 基因的特点，设汁两对引物，建立了 PCR 方法，使用该方 法分别对 PRV、 PCV2 ， PPV、 CSFV、 PRRSV 进行 PCR 检测，结果只能从 PRV Fa 野毒株 DNA 提取物中扩增出 354 、 237 bp 的 核背酸片段，从 PRV Bartha-K61 疫苗株扩增出 237 bp 的片段，其他病毒均未扩出条带，达到了区分疫苗株与野毒株的目的。 同时，应用该方法对吉林省各大猪场进行了临床病料检测，结果表明，在采集的 205 份病料中有 32 份检测为猪伪狂犬病病毒 野毒感染，阳性率为 15.6% 。 关键词:猪伪狂犬病;gE 基因;gB 基因 中图分类号:S858.28 文献标识码:A 文章编号: 1671-7236(2011 )1 2-0166-04 迄今为止，世界上已有 50 多个国家报道了有关 最重要的毒力基因，与 PRV 的致病力密切相关，但 病毒缺失 gE 基因后依然能复制(郭万柱等，2000) 。 伪狂犬病的病例。自 20 世纪 70 年代以来，人们将 伪狂犬病病毒(PRV) 的自然弱毒苗和基因缺失疫 20 世纪 90 年代以来，西方许多发达国家都规定只 苗广泛应用到了伪狂犬病的防制工作中，大大减少 准生产 gE 基因缺失的疫苗，使用 gE 基因缺失疫苗 了伪狂犬病对养猪业的危害。疫苗的应用使得大部 成为世界防制伪狂犬病的首选办法。 gB 基因与病 分猪免于发病，但这种方法却不能阻止野毒的潜伏 毒毒力元关，但无论是强毒株还是疫苗株，在复制过 感染(Berke 等，2003) 。近年来，PCR 技术得到了快 程中都必须有 gB 基因的参与(Harley 等， 2001 )。 速发展，国内外许多学者将它应用于 PRV 的检测。 因此，本试验根据缺失的 gE 基因和保守的gB 基因 Bartha-K61 是 PRV 基因缺失株，缺失了整个 gE 基 序列设计两对引物，建立了检测 PRV 野毒株且区 因，是中国使用较早的一种疫苗株。 gE 作为 PRV 分疫苗株的 PCR 方法。同时，应用该方法对吉林省 各大猪场进行了临床检测。 收稿日期:2011-04-25 1 材料与方法 作者简介:董浩(1979 一) ，男，吉林人，讲师，博士，主要从事动物 1. 1 材料 病毒学研究。 1. 1. 1 病毒 PRV Fa 野毒株(gE+ /gB+) 由中国 通铺作者:胡桂学(1963-) ，男，教授