猪前脂肪细胞增殖与分化的初步观察.pdfVIP

2010 年 6 月 第 35 卷第 3 期 西南师范大学学报(自然科学版) Vo l. 35 No. 3 Journal of Southwest China Normal University (Natural 坠ience Edition) Jun. 2010 文章编号: 1000 - 5471 (2010)03 - 0208 - 04 猪前脂肪细胞增殖与分化的初步观察 陈绍红1 ， 陈育峰2 ， 刘 铀1 ， 刘艳芬2 1.广东海洋大学生化中心，广东湛江 524088 ， 2. 广东海洋大学农学院，广东湛江 524088 摘要:从新生仔猪颈部皮下采集脂肪组织，用胶原酶N 消化分离前脂肪细胞，于 37 t:, 5%C02 、饱和湿度下培 养前脂肪细胞，通过 MTT 法、汹红 O 染色及脂蛋白脂酶CLPL活性测定对培养细胞进行鉴定.结果表明z 培养 3 d 后，细胞增殖迸人对数增长期，其生长曲线呈 S 形z 分化的脂肪细胞内充满脂肪滴，细胞形态由梭形逐渐变为 圆形g 随着前脂肪细胞的分化， LPL 活性显著下降. 关键词:猪z 前脂肪细胞z 增殖;分化 中图分类号: S828 文献标识码:A 动物脂肪沉积是脂肪细胞数量增加、体积增大以及脂滴聚集的结果.近年来的研究表明，脂肪组织不 仅是机体能量储存的场所，同时也能分泌诸如抵抗素(resisitin)川、瘦素(!eptin)[幻、肿瘤坏死因子 α(TNF _ a)[3J ，白细胞介素 60L - 6)川等多种脂肪细胞因子参与机体能量代谢调节，脂肪细胞的增值、分化以及 脂肪沉棋也受到诸多因素的调节[5-7J 因此.建立试验动物或细胞模型，阐明动物脂肪细胞生长发育、脂肪 沉积的规律，有利于更好地通过营养环境以及管理，调控动物体脂的分布和沉积，进而改善肉品品质$同 时也有利于深入研究人类肥胖过程中能量代谢紊乱、糖尿病、膜岛素抵抗以及心血管疾病等多种并发症的 发病机制，为有效控制上述疾病提供理论依据.猪作为生脂能力最强的动物之一，具有与人相似的生理和 代谢特点凶，与 3T3 - Ll, 3T3 - F442A 等啃齿类动物脂肪细胞模型相比，原代培养的猪前脂肪细胞能更 好地反映脂肪细胞增殖、分化以及生脂作用的基本规律，对于进一步探讨不同种属动物脂肪组织生长发 育、脂肪沉租与分布规律有着积极的意义. 本研究以新生仔猪皮下脂肪组织为试验材料，通过原代细胞培养、形态学观察以及标志酶检测，探讨 了猪前脂肪细胞的增殖与分化规律，为进?步建立脂肪细胞模型、研究前脂肪细胞生长发青规律及其调控 机制奠定了基础. 1 材料与方法 1. 1 脂肪组织 断颈处死3 日龄杂种仔猪，猪颈部皮下无菌采集脂肪组织，用灭菌 KRB 缓冲液(pH 7. 2) 反复清洗，备用- 1. 2 主要试剂 DMEM/F12 培养基(SIGMA) ， MTT 染料(鼎同生物技术有限公司， SIGMA 分装) ，台盼蓝染料(国药 集团化学试剂奋限公司)，油红 0 染料(国药集团化学试剂有限公司)， N 型股原酶(鼎国生物技术有限公 司， SIGMA 分装) ，小牛血清(湖北三利生物有限公司)，二甲基亚枫(DMSü， AR，国药集团化学试剂有限 公司)， HEPES(华美生物工程公司)，脂蛋白脂酶测定试剂盒(南京建成生物技术公司). 收搞期: 2009 - 06 - 17 基金项目 z 广东海洋大学人才引进资助项目CNo.0612068). 作者简介2 陈绍红0973 -).女，广东湛江人，实验师，主要从事生物化学与分子生物学研究. 通讯作者: ~J 艳芬，教授. 第 3 期 R串绍红，等g 猪前旨肪细胞，曾更直与分化的初步观察 209 1.3 猪前脑筋细胞的原代i8养 用灭菌眼科剪将脂肪组织剪碎至大小约 1 mm.