猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

裔牧兽医学报 2010.41(8):1049-1053 Acta Veterinaríα et 200technica Sinica 猪星状病毒 SYBR Green 1 实时荧光定量 PCR 检测方法的建立与初步应用 商晓桂1 ， 2 ，都伟1.2 ，杨莲茹2 ，杨志彪1 ， 华修国1\ 朱建国l ，崔立l O. 上海交通大学农业与生物学院，上海 200240 ， 2. 内蒙古农业大学动物医学与科学学院，呼和浩特 010018) 摘 要:*研究旨在建立…种能够快速、简便、灵敏地检测猪t害，状病毒的基于 SYBR Green 1 实时荧光定量 PCR 方法。根据巳报道的猪墨状病毒ORF2 基因序列，设计并合成 1 对引物，通过 PCR 扩增 ORF2 基因片段，将测序正 确的 ORF2 基因片段克障人 pMDl8-丁载。体，转化大肠杆菌 DH5哑，经测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模 板建立 SYBR Green 1 荧光定最 PCR 标准曲线和熔解曲线，并对其灵敏性、特异性和建复性进行验证。结果表明， 1 猪撞状病毒荧光定量 PCR 的标准曲线。值与模板浓度量良好的线性关系，熔解曲线特异，灵敏度rlT达 1 X 10 拷 贝，是普通 PCR 检测方法的 100 倍，特异性和建复性较好。本次建立的猪展状病毒荧光定最 PCR 检测方法具有快 速、简便、敏感等优点，有重要的实用价值。 关键词: SYBR Green 1 ;猪庭状病毒p 检测 中阁分类号:5852. 659. 6 文献标识码:A 文章编号:0366-6964 (2010) 08-] 049-05 Development and Application of SYBR Green 1 Real-time PCR Technique for Detecting Porcine Astrovirus 1Z 2 SHANG Xiao-gui . , GUO Wei 1.2 , YANG Lian-ru , YANG Zhi-biad , 1 1 1 HUA Xiu-guo * , ZHU Jian-guo , CUI Li (1. 21附wsisand comμrative Medicine Grouρ ， Shanghai ] iao Tong University , Shanghai 200240 ， αina; 2. College 0 f Animal Science and Veterinary Medicine , Inner Mongolia Agricultural University , Hohhot 010018 , China) Abstract: The aim of this