猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

第 32 卷第6 期 中国预防兽医学报 Vo l. 32 ,No.6 Jun. 2010 2010 年 6 月 Chinese Joumal of pt宫ventive Veterinary Medicine 猪瘟兔化弱毒疫苗株 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立及初步应用 刘大伟 1 ，3 ，张小飞 2Y ，胡来根23 ，李 郁 1 ，尹秀凤3 ，毛火云 3 (1.安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥 23佣36; 2. 江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 21∞14; 3. 南京天邦生物科技有限公司，江苏南京 211102) 摘 要:为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法，本研究根据 GenBank 中登录的 HCLV 株 ms 基因纽序列，在 E 基因序列区内设计一对引物和一条 TaqMan 探针，建立了检测 HCLV 的荧光定量 RT-PCR (FQ RT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达 3.84 拷贝 /μL; 而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综 合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验纽批内变异系数为1.05 %~1.84 %，批间变异系数 为 3.70 %~5.43 %。通过对32 批HCLV 半成品抗原和9 批成品疫苗，分别用经典的兔检法测定兔体感染量(阳D) 和新建立的 FQ RT-PCR 方法进行检测比较，两者有较好的相关性。结果表明，该方法具有快速、敏感、特异性 强、稳定性好等优点，对HCLV 生产配制及成品检验具有指导作用。 关键词:猪瘟兔化弱毒疫苗;荧光定量 RT-PCR; 检测;初步应用 中图分类号: S852.5 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2010)06-例46-05 Development and preliminary application of fluorogenic TaqMan quantitative RT-PCR for detection of hog cholera lapinized virus l 2 l , LIU Da-wei 3 , ZHANG Xiao击j2，3.， HU Lai-gen ,3, LI Yu , YIN Xiu-fengl , Mao Huo节lß3 (1. College of Animal Science and Technology , Anhui Agricultural University , Hefei 230036 , China; 2. lnstitute ofVeterin町Medicine， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences , Nanjing 21∞14， China; 3. Nanjing Tianbang Bio-indus町Co.， LTD , N町ing 211102 , China) Abstract: A fluorogenic quantitative RT-PCR (FQ RT-PCR) assay ofthe hog cholera lapinized virus (HCLV) was established using a pa让 of primers and an intemal TaqMan fluorog