玛丽安万年青茎段培养中内源菌污染的防止研究要点.pptVIP

1.4.7 不同利福平和氯霉素浓度组合的筛选 以50mg.L-1利福平作对照，设计25mg.L-1利福平+25mg.L-1氯霉素、25mg.L-1利福平+50mg.L-1氯霉素、50mg.L-1利福平+25mg.L-1氯霉素和50mg.L-1利福平+50mg.L-1氯霉素4种组合，进行最佳浓度组合筛选。 1.5 培养条件与统计 培养室温度25-28℃，光照2000-4000lx，每天光照12-14h，20d后观察统计。数据采用SPSS10.0软件分析处理。 过滤灭菌 2 结果与分析 2.1 玛丽安万年青茎段培养中内源菌污染症状 经过严格的常规消毒，玛丽安万年青茎段初代培养中仍然存在严重的污染。有些污染并不形成明显的菌落，而只在培养基内部形成“丝状物”或“晕状物”，不容易被肉眼察觉，如不仔细观察很容易被忽视，只在背光检查时才易被发现，随着培养天数的增加，菌量逐渐累积，才在培养基上显现出来，见图6。 A B 图6 玛丽安万年青茎段培养中内源菌污染症状（A丝状，B晕圈状） 2.2 外植体的预处理对玛丽安万年青茎段培养污染防止的效果 采用ANB1和ANB2处理材料所取得的效果较好，未污染率和成活率都比较高，都达到50%以上。其中ANB2的未污染率达到76.7%、成活率为50.0%（表1），说明ANB2这种抗生素能比较有效地抑制外植体内源细菌的污染。 表1 不同抗生素预处理对玛丽安万年青茎段培养污染防止的影响 2.3 减压抽滤对玛丽安万年青茎段培养污染防止的效果 采用0.1% HgCl2浸泡，减压灭菌8 min，再用0.1% HgCl2消毒材料，未污染率为60.0%，成活率为43.3%，效果优于常规消毒（表2）。 表2 常规消毒与减压抽滤对玛丽安万年青茎段污染防止效果的比较 2.4加入抗生素后减压灭菌对玛丽安万年青茎段培养污染防止的效果 加入不同抗生素后进行真空减压灭菌，对污染防止的效果低于对照，实验中还观察到有的组合起化学反应，从而影响了抑菌的效果（表3）。 * 玛丽安万年青茎段培养中内源菌污染的防止研究 一、目前主要进行组织培养研究的观叶草本植物 1 天南星科 粗勒草属 红叶粗勒草 2 天南星科 绿萝属 金叶葛、阳光葛、白金葛 红叶粗肋草可大致分为4类： 1）红脉类：叶脉或近叶脉叶肉呈现红色，如红峡、红龙、邦德、龙焰（烟花）； 2）全红叶类：叶片全部或大部分呈现红色，如日出； 3）花叶类：叶片上呈现不规则的红色斑块或条纹，如日出、如意、贵夫人； 4）镶边类：叶片边缘为红色，如口红、极光。 红叶粗肋草系列——贵夫人（吉祥） 红叶粗肋草系列——如意（火红万年青） 红叶粗肋草系列——日出（狐仙、激情） 红叶粗肋草系列——灿烂（烟花） 红叶粗肋草系列——邦德 红叶粗肋草系列——红峡 红叶粗肋草系列——午夜女郎（中国红） 红叶粗肋草系列——孔雀开屏 红叶粗肋草系列——极光（万年红） 红叶粗肋草系列——甜梦 红叶粗肋草系列——红龙（中国龙） 其他保存品种（耐寒性能差） 柠檬美 口红 龙焰 绿萝类 阳光葛 金叶葛 二、玛丽安万年青茎段培养中污染的防止 玛丽安万年青又名粉黛(Dieffenbachia Camilla)，为天南星科花叶万年青属(又名黛粉叶属)植物。原产南美巴西，喜温暖、湿润和半阴环境，它为多年生常绿草本。茎多肉质，叶卵状椭圆形、宽大，绿色叶片嵌入黄、白色斑，优美高雅，1996年从国外引进，是室内装饰的重要观叶植物。 黛粉叶叶片大，具有美丽的色斑，适合盆栽观赏，点缀客厅、书房，清新大方，十分舒泰、幽雅。 用它摆放光度较低的公共场所，黛粉叶仍然生长正常，碧叶青青，枝繁叶茂，充满生机，特别适合在现代建筑中配置。 在植物的组织培养过程中，存在两种类型的污染，一是通常讲的污染，即因外植体消毒不彻底、无菌操作和培养过程中如培养基、接种工具、接种室消毒不严格或操作不规范而导致的污染，见图1-4。 还有一类是内源菌污染。那些生长在高温多雨的热带、亚热带植物和多年生木本植物容易表现内源细菌污染。内源细菌不能被一般的表面消毒方法所消除，若未能对其有效的消除，它将随着材料进入培养过程，引起不同程度的污染，产生程度不一的危害。在早期往往会导致培养失败，增殖率降低，培养物生长减缓，玻璃化苗增加等;后期则导致试管苗移栽困难和死亡。有时污染还会引起培养物的遗传变异。 赛雷氏杆菌 图1 水迹状 图2 粘液状 图3 发泡状 图4 天南星科黛粉叶属的玛丽安万年青在茎段培养中特别容易污染，我们以其作为试材，通过预培养、减压灭菌和在培养基加入不同种类的抗生素、不同浓度及不同浓度的组合处理，进行筛选研究，以期找到防止外植体内源细菌污染的有效方法。 1 材料和方法 1.1 材料 天南星科（Araceae）黛粉叶