中药复方对2型糖尿病大鼠的胰腺中Bcl-2、Bax表达的影响.docVIP

中药复方对2型糖尿病大鼠的胰腺中Bcl-2、Bax表达的影响 作者：杨宏莉，张宏馨，卢淑兰，李军，王燕，张伟伟，蒋雪 【摘要】 目的研究中药复方——本草消渴丹对糖尿病模型大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响，探讨复方中药 治疗 糖尿病的作用机理，为临床用药提供 科学 依据。方法将32只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只，造模组24只。造模组给予高糖、高脂饲料3周后，一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ，25 mg/kg），继续予高糖、高脂饲料4周，造模成功后，随机分为糖尿病模型组、复方中药治疗组和阳性药物对照组，分别给予生理盐水、本草消渴丹和二甲双胍片灌胃4周，每周末断尾取血检测空腹血糖值。治疗4周后检测各组大鼠血糖变化，用RT-PCR检测胰腺凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化。结果中药复方治疗组糖尿病大鼠的体质量增长明显比模型对照组快，血糖水平、血糖曲线下面积均低于模型对照组，凋亡相关基因Bcl-2的表达升高，而Bax表达降低。结论本草消渴丹治疗糖尿病的机制之一是通过抑制胰腺细胞的凋亡来实现的。 【关键词】 中药复方； 糖尿病； 凋亡； Bcl-2； Bax； 胰腺 　糖尿病是一种常见的内分泌系统代谢障碍性疾病，其发病率有逐年上升趋势，其特征性表现为高血糖和糖尿。西医方面虽有多种治疗方法和药物，但由于西药的毒副作用，使西药在糖尿病的治疗方面未能取得突破性进展。近年来，中医药在防治糖尿病方面表现出巨大的潜力，无论是单味中药还是中药复方，在治疗糖尿病方面均显示出很大优势［1,2］。本实验以验方生地、山药、枸杞和山萸肉为基础经提取制成本草消渴丹，通过干预2型糖尿病大鼠模型，观察其对2 型糖尿病大鼠血糖和胰腺凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达的影响，为临床用药提供科学依据。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 药物将复方中药（主要成分：生地20 g，山药20 g，枸杞子10 g，山萸肉15 g）分别用醇提水沉法提取、浓缩、干燥、制成颗粒剂，每克颗粒剂相当于原药材9.2 g，由河北大学医学部药剂教研室提供，以上药材购自保定市中药饮片有限公司。盐酸二甲双胍片，规格每片0.25 g，由天津太平洋制药有限公司提供，批号071204；链脲佐菌素（STZ）由美国Sigma提供，批号S-0130；TRI-ZOL和RT-PCR药盒等购自GIBCO-BRL公司, 100 bp DNA梯度标记物为PROMEGA公司产品。其他试剂均为市售产品。 　　1.2 仪器AR1530 电子 分析天平(1/1000，美国奥豪斯)；GT-1640京都血糖仪（SUPER GLUCOCARD）及试纸(由日本ARKRAY，Inct 提供)；PCR仪，型号T1/T1+，德国Biometra生产；SP-2102/756型紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司生产；凝胶成像系统，BIO-RAD Company生产。 　　1.3 高脂饲料的制备［3］ 基础饲料：碳水化合物占60%，蛋白质占22%，脂肪占10% (植物脂肪为主)，其它成分占8%。高脂、高糖饲料由基础饲料加炼猪油10%、蔗糖20%、猪油10%、胆固醇2.5%、胆酸钠1%，其中碳水化合物占50%，蛋白质占13%，脂肪占30%(动物脂肪为主)，其它成分占7%，由河北医科大学医学动物实验中心加工成饲料颗粒。 　　1.4 动物清洁级健康雄性Wister大鼠32只，体质量（281.18±11.38）g，由河北医科大学实验动物中心提供（合格证号604104），饲养在室温（20～25），相对湿度40%～70%的环境条件下，每笼8只，共分4笼，自由采食、饮水。 　 　2 方法 　　2.1 造模与分组［3］ 将上述大鼠适应性饲养1周后，称重，随机分为两组，第1组8只为正常对照组，喂以基础饲料，第2组24只大鼠用于构造2型糖尿病模型。构造模型组以高脂、高糖饲料饲喂3周后，一次性腹腔注射STZ 25 mg/kg体质量(STZ溶于柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，所配浓度为10 mg/ml)；对照组腹腔注射相应体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。构造模型组继续高糖、高脂饲料饲养4周后，禁食12 h，按2 g/kg体质量灌喂20%D-葡萄糖溶液，做口服葡萄糖耐量试验，凡0 min和120 min血糖分别≥7.8 mmol/L或葡萄糖负荷后2 h血糖≥11.0 mmol/L的大鼠［4］ 为造模成功。 　　选择造模成功的大鼠24只按体质量编号，参照随机数字表法分为3组，分别为模型组、二甲双胍组、本草消渴丹治疗组。各组均继续喂以高糖高脂饲料4周，并每周称体质量。 　　2.2 治疗第7周后，各组动物分别灌胃相应药物或生理盐水，1次/d，给药按人与大鼠体表面积比折算成等效剂量。对照组、模型组分别每日灌胃等剂量的生理盐