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前列腺素E1脂质体对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用
前列腺素E1脂质体对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用
【摘要】 目的 考察前列腺素E1脂质体(LipoPGE1)对大鼠离体心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用。方法 将24只大鼠随机分成3组,LipoPGE1 治疗 组,PGE1治疗组及对照组(IR组),治疗组给予含药停搏液,对照组单纯给KH液;37下建立心肌IR模型,预灌注15 min,缺血40 min,再灌注40 min,分别测量复灌20 min、复灌40 min时心功能指标:心率、左室收缩压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)及磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度。结果 LipoPGE1治疗组±dp/dtmax的恢复率较PGE1组大(P0.01),LDH 浓度在复灌20和40 min时明显低于IR组(P0.01)。而PGE1组复灌20和40 min时CPK释放量低于IR组而高于LipoPGE1治疗组,说明PGE1能部分抑制再灌注期CPK的漏出而脂质体包裹能增强这种效应。结论 LipoPGE1对实验性心肌IR损伤有保护作用。
【关键词】 前列腺素E1脂质体;心肌缺血再灌注损伤;磷酸激酶;乳酸脱氢酶
前列腺素E1(PGE1)具有舒张血管,抑制心肌多核中性粒细胞(PMN)及血小板的聚集和活化,稳定生物膜和细胞保护等作用,广泛用于治疗闭塞性动脉硬化、心肌缺血、休克等多种疾病〔1〕。我室与某生物技术公司合作,利用开逆向蒸发法及MFIC技术成功制备粒径大小适合,且均匀、包封率达到90.0%以上的PGE1脂质体(Liposomal PGE1,LipoPGE1)。本研究观察了预灌注LipoPGE1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响,观察LipoPGE1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 成年SD大鼠24只,200~250 g,雌雄各半,由第三军医大学野战外科研究所动物中心提供。
1.2 主要药品试剂 LipoPGE1由本单位合作制备,PGE1针剂为重庆药友制药有限责任公司产品(博乐斯),批号040601。
1.3 方法
1.3.1 灌流液的配制 改良的KrebsHenselEit (KH)液组成成分(单位:mmol/L):NaCl 118.9,KCl 4.69,CaCl2 2.2,MgSO4 1.17,KH2PO4 1.17,NaHCO3 17.9,EDTA 0.03,Glucose 9.99。先以超纯水配制成含NaCl、KCl、MgSO4、KH2PO4、NaHCO3、EDTA的母液,使用时稀释母液加入CaCl2和Glucose配制成所需浓度。
1.3.2 模型制作 用3%戊巴比妥钠(0.1 ml/100 g)腹腔注射麻醉后将大鼠背位固定,切开腹腔,下腔静脉注入3%浓肝素(0.1 ml/100 g)以防血栓形成。迅速开胸剪去胸廓,暴露心脏及大血管,剪断肺静脉。迅速取出心脏,在预冷(4) 改良的KH液中作主动脉插管,距主动脉根部3~4 mm处剪一小口,插入内径约3 mm的聚乙烯套管并结扎,再置于37 保温灌流室内。另将导管插入心尖处左心室内,经换能器连在生理多导记录仪上,于Langendorff心脏灌流装置主动脉逆行灌注KH缓冲液预灌流15 min,以冲洗残留于心脏的血液,灌流液恒温(37)。恒压(60 mmHg),并为100%O2饱和。缺血40 min,再灌注40 min。
1.3.3 分组及用药 随机将24只大鼠分成3组,LipoPGE1治疗组,PGE1治疗组及对照组(IR组),每组8只,IR组继续灌注KH液,治疗组自预灌流15 min持续灌注含药物0.5 μmol/L的KH液。
1.3.4 心功能指标的测定 利用二通道生理记录仪分别测量各组缺血前、复灌20 min、复灌40 min时心功能指标:心率(Rate)、左室收缩压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)。
1.3.5 生化指标检测 分段收集流出液(缺血前、复灌20 min、复灌40 min),用4冷玻璃瓶收集冠脉流出液1~2 ml,采用乳酸测定法测定心肌乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光分光光度法测定磷酸激酶(CPK)活性。
1.3.6 心肌超微结构的考察 实验结束时,取左前壁心尖上方5 mm处的心肌组织,立即投入预冷的2.5%戊二醛固定,经PBS漂洗,10%四氧化锇固定后,用不同浓度的酒精梯度脱水,再用丙酮脱水,100%丙酮与纯包埋剂11混合包埋,加温聚合,定位修块,LKBV型超薄切片机切片,醋酸铀、柠檬酸铅 电子 染色,用透射电镜(H 300)观察超微结构的变化。
1.4 统计学处理 数据以x±s表示,采用SPSS11.
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