RNF149通过泛素化介导的CD9降解调控细胞增殖.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2013, 40(12): 1230~ 1238 通过泛素化介导的 降解调控细胞增殖* RNF149 CD9 李燕1, 2) 阮林浩1, 2) 索塔林1, 2) 王 鹏1, 3) 唐 捷1)** 1) 2) 3) ( 中国科学院生物物理研究所，北京100101 ； 中国科学院大学，北京100049 ； 中国科学技术大学，合肥230026) 摘要 选取功能未知的泛素连接酶RNF149 作为研究对象 该分子同GRAIL(gene related to anergy in lymphocytes)具有较高的 同源性，属于 型跨膜蛋白 激光共聚焦显微镜的观察结果显示，RNF149 是一个定位在溶酶体上的蛋白质，它与CD9 在细 胞内有共定位 免疫共沉淀实验证明RNF149 与CD9 有相互作用 RNF 149 通过泛素分子的第48 位赖氨酸多泛素化CD9 在HeLa 细胞 转染数量一定的CD9 质粒和数量梯度增加的RNF 149 质粒24 h 后，蛋白质印迹检测外源RNF 149 和CD9 的 表达，结果表明，随外源RNF149 表达量梯度增高，外源CD9 的表达量梯度降低 在HEK293T 细胞内以shRNA 敲低内源 的RNF 149 ，并检测内源CD9 的变化，发现RNF149 被敲低后内源CD9 的量增多 上述结果提示，CD9 很有可能是RNF 149 的底物，被RNF 149 通过泛素化降解 此外，RNF 149 被敲低的HEK293T 细胞增殖受到抑制，这可能与其内源CD9 的量增 多有关，提示RNF 149 可能是一种细胞增殖的调控因子 关键词 RNF149，CD9，细胞增殖，泛素化，泛素连接酶，溶酶体 学科分类号 Q5 ，Q2 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2013.00 135 蛋白质是生命活动的主要执行者，蛋白质可以 酶活性，并在生理活动 发挥重要的调控作用 通过共价修饰的方式结合种类繁多的分子 这类修 为了进一步揭示GRAIL 家族其他分子对于细 饰会使蛋白质的构象、酶活性、细胞定位、同其他 胞生理活动的重要意义，我们在BioGPS 网站上检 蛋白质的相互作用以及蛋白质的稳定性等性质发生 索了功能未知的GRAIL 家族分子在不同组织和细 变 蛋白质通过这种 变对生命活动发挥重要的 胞系 mRNA 的水平 分析检索结果发现，人 调控作用 泛素化修饰做为一种重要的蛋白质共价 RNF149 在大多数细胞系 广泛表达，且在T 细胞 修饰方式已被证明在细胞正常生理活动的各方面有 高表达 这一现象提示，RNF149 可能具有重要生 着重要的调控作用[1] 在蛋白质泛素化修饰过程 理功能，所以我们选取了RNF149 作为研究对象 ，泛素连接酶是对被泛素化的底物有特异识别作 GRAIL 家族也被称为PA-TM-RING 家族，这 用的关键酶，在泛素化反应 起着重要作用 2008 是因为该家族的分子在其N 端有一个与蛋白酶相 [2] 年，Anandasabapathy 等 首次发现，RNF 128 (gene 关的结构域(PA) ，该结构域很可能与结合其他蛋白 + related to anergy in lymphocytes，GRAIL) 与CD4 T 质有关，在其 C 端有一个 RING 锌指结构 细胞的免疫无能有关，并将GRAIL 家族的分子定 (RING-finger) ， 部有一 段 跨膜 区(TM) [3]