2015年CLSI药敏试验标准引入CarbaNP试验.docVIP

2015年CLSI药敏试验标准引入Carba NP试验检测碳青霉烯酶Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）制定的药敏试验标准。CLSI2015年药敏标准（M100-S25）的最大改变之处在于引入Carba NP试验和流行病学cut off值的概念。本文将重点推介Carba NP试验，以供实验室参考。 Carba NP确证试验是一种肠杆菌科、铜绿假单胞菌和不动菌属细菌中碳青霉烯酶的表型检测方法。该试验采用比色法，目前主要用于流行病学研究或感染控制，尚不推荐作为临床常规使用。研究表明，Carba NP试验在检测KPC、NDM、VIM、IMP、SPM和SME型碳青霉烯酶方面具有较好的敏感性（90%）和特异性（90%）。 1. Carba NP试验试剂配制说明（表1）。 表1. Carba NP试验试剂的配制 名称 配制过程 储存 10 mM七水硫酸锌溶液 1)称量1.4g ZnSO4×7H2O 1年或不超过各成分保质期 2)加入500ml试剂级纯水 3)混合，室温保存 0.5%酚红溶液 1)称量1.25g粉红粉末 1年或不超过各成分保质期 2)加入250ml试剂级纯水 3) 混合，室温保存 4)使用前混匀 0.1 N氢氧化钠溶液 1)将20ml 1N NaOH加入180ml试剂级纯水中 1年或不超过各成分保质期 2) 室温保存 Carba NP试剂A溶液 1)取25-50ml烧杯，将2ml 0.5%酚红溶液加入到16.6ml试剂级纯水中 2周或不超过各成分保质期（溶液应为红色或橙色，其他颜色均不可使用） 2)加入180ml 10mM硫酸锌溶液 3)使用0.1N NaOH溶液（或10% HCl）调整pH值为7.8±0.1 4)4-8℃小瓶保存，避免长时间光照 Carba NP试剂B溶液（A液+6mg/ml亚胺培南） 1)计算B液的需要量，需考虑每株待测菌100ml/管、质控菌株和未经处理的试剂质控。如检测两株待测菌，阳性和阴性对照、未经处理的试剂质控，共需500ml B液。 最多3天（4-8℃） 2)称量约10-20mg亚胺培南粉末。建议至少称量10mg粉末。将实际称重量除以6，以计算所需加入的A液量。 2.Carba NP试验的结果解读（图1） 1.管“a”（A液未加亚胺培南）和管“b”（B液加入亚胺培南）的颜色反应比较 结果解释： 管“a”：溶液A（作为内质控） 管“b”：溶液B 结果解释 红色或红-橙色 红色或红-橙色 阴性，非碳青霉烯酶产生株 红色或红-橙色 浅橙色、深黄色或黄色 阳性，碳青霉烯酶产生株 红色或红-橙色 橙色 无效 橙色、浅橙色、深黄色或黄色 任何颜色 无效 3.检测碳青霉烯酶的试验比较见表2 表2. 用于流行病学研究或感染控制目的检测碳青霉烯酶相关试验的比较 改良Hodge试验 Carba NP试验 其他(如分子检测) 细菌 对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌 对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌属 对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌属是否产生碳青霉烯酶；检测改良Hodge试验和Carba NP试验阳性菌株的碳青霉烯酶类型。 优势 易于操作；无需特殊的试剂或培养基 快速 除检测是否产生碳青霉烯酶外，亦可检测碳青霉烯酶类型 局限性 1)假阳性：产生ESBL或AmpC酶合并孔蛋白缺失的菌株；2)假阴性：偶尔出现（产NNDM金属酶菌株）；3)仅用于肠杆菌科细菌 1)需要特殊的试剂；2)某些菌株检测结果无效；3)无法检测某些碳青霉烯酶（如染色体编码的OXA型碳青霉烯酶） 1)需要特殊的试剂和仪器；2)只对靶基因特异；3)对未检测的特异性碳青霉烯酶基因可出现假阴性