柱后衍生原理和关键点PPT.pptVIP

衍生化的定义 　衍生化是一种利用化学变换把化合物转化成类似化学结构的物质。 一般来说，一个特定功能的化合物参与衍生反应，溶解度，沸点，熔点，聚集态或化学成分会产生偏离。由此产生的新的化学性质可用于量化或分离。 衍生化的目的 衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。把难于分析的物质转化为与其化学结构相似但易于分析的物质，便于量化和分离。 对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性; 对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的响应。 衍生化常用的反应有酯化、酰化、烷基化、硅烷化、硼烷化、环化和离子化等 衍生化试剂 简单的说:它能帮你将不能分析的样品通过衍生化试剂反应转化为可分析的化合物. 种类:烷基化试剂、硅烷化试剂、酰化试剂类、荧光衍生化试剂、 紫外衍生化试剂、苯甲酰氯为衍生化试剂、羟基衍生化试剂 、 手性衍生化试剂、氨基衍生化试剂。 判断衍生化反应的指标 1、反应是否迅速、定量进行，反应重复性好坏，反应条件是否温和，是否容易操作。 2、反应选择性高，最好只于目标化合物反应。 3、衍生化产物只有一种，反应的副产物和过量的衍生化试剂应不干扰目标化合物的分离和检测。 　 4、衍生化试剂通用性好，价廉易得。 衍生化方法应用不当的弊端 1、柱上衍生化可能损伤色谱柱。 　 2、某些衍生化试剂需氮气吹干。 　 3、衍生化不完全，影响灵敏度。 　　 4、衍生化试剂不当，产物分子量过大。 衍生化分类 1. 从是否形成共价键来说，可分为：标记和非标记反应。 标记反应是在反应过程中，被分析物与标记试剂之间生成共价键； 所有其它类型的反应，如形成离子对、光解、氧化还原、电化学反应等都是非标记反应。 2.从衍生反应的场所来说，可分为： 柱前衍生化(pre-columnderivatization)；柱上衍生化(on-columnderivatization)；柱后衍生化(post-columnderivatization)三种。 3.从是否与仪器联机的角度来分有： 在线(on-line)、离线(off-1ine)和旁线(at-line)(自动化)三种。 目前在HPLC中以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多，旁线衍生化方法是发展方向。 柱前衍生和柱后衍生定义 柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物; 柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。 柱前衍生法的优缺点 优点： 相对自由地选择反应条件； 不存在反应动力学的限制； 衍生化的副产物可进行预处理以降低或消除其干扰； 容易允许多步反应的进行； 有较多的衍生化试剂可选择； 不需要复杂的仪器设备。 缺点： 形成的副产物可能对色谱分离造成较大困难； 在衍生化过程中，容易引入杂质或干扰峰，或使样品损失。 柱后衍生的优缺点 优点： 形成副产物不重要，反应不需要完全，产物也不需要高的稳定性，只需要有好的重复性即可； 被分析物可以在其原有的形式下进行分离，容易选用已有的分析方法。 缺点： 对于一定的溶剂和有限的反应时间来说，目前只有有限的反应可供选择； 需要额外的设备，反应器可造成峰展宽，降低分辨率。 柱后衍生技术的应用 氨基酸； 链霉素以及其他氨基糖苷类抗生素，包括：庆大霉素、阿泊拉霉素、新霉素等。 氨基甲酸酯：?? 涕灭威亚砜、涕灭威砜、草氨酰、灭多虫、3-羟基呋喃丹、涕灭威、残杀威、呋喃丹、 西维因（胺甲萘）、1-萘酚、灭虫威、BDMC内标 草甘磷以及百草枯、敌草快等除草剂 黄曲霉毒素等毒素。 其它应用：??聚醚抗生素、串珠镰孢毒素、贝毒等毒素、单端孢莓稀毒枝菌素和赭曲霉 毒素、生物胺、甲醛、类固醇等。 如何实现柱后衍生 衍生试剂 氨基甲酸酯类农药的柱后衍生 原理 氨基甲酸酯类农药的结构中均含有下N-甲基氨基甲酰基。 氨基甲酸酯类农药的柱后衍生 氨基甲酸酯类农药按照在C18、 C8柱上的洗脱顺序流出。 分离后的氨基甲酸酯农药首先在100℃下在NaOH作用下水解释放出醇，碳酸盐和甲胺。在第二个柱后反应中甲胺与邻苯二甲醛（OPA和2-巯基乙醇反应生成有强荧光吸收的1-甲基-2-蚓哚类化合物，被荧光检测器检测且具有很低的检测限，满足残留分析方法的要求。 氨基甲酸酯类农药的柱后衍生 原理 氨基甲酸酯类农药的柱后衍生 氨基甲酸酯类农药的柱后衍生 氨基甲酸酯分析的柱后条件： 衍生试剂1：水解衍生试剂CB 130 衍生试剂2：100mg OPA, 2g Thiofluor溶解于950mL CB 910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度