辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化邻苯二胺反应动力学的研究.pdfVIP

维普资讯 第22卷 ，第3期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vo1．22，No．3．pp436—440 2002年 6月 SpectroscopyandSpectralAnalysis June，2002 辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化邻苯二胺反应动力学的研究 姜远良，冯春梁 辽宁师范大学化学系．江宁 大连 116029 摘 要 本文对辣根过氧化物酶催化过氧化氢与氧化邻苯二胺合成2，3-二氨基吩嗪反应动力学进行了研 究。首先是用辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化邻苯二胺合成了氧化产物，并且对反应条件、酸度，温度，邻 苯二胺，过氧化氢与辣根过氧化物酶不同的摩尔比等进行了研究。用紫外一可见光谱 、红外光谱以及元素分析 法对该产物进行了表征，结果表明，其产物为2，3-二氨基盼嗪。然后用紫外可见分光光度法，根据Michadis- Menten(M-M)方程研究了辣根过氧化物酶催化过氧化化氢氧化邻苯二胺反应，选择了最佳实验条件，确定了 最大吸收波长 ^=446．3nm，oH=4．85和反应温度 =22℃，进行了一系列实验，从而确定了体系的反应级 数，其结果表明，这个反应可以视为单底物反应进行处理，并且在实验和理论方面作出了论证，并且还求出 KH．=602×10一 mol·L～， =7．2×10一。zXA·min 。 主厝词 催化动力学；分光光度法；辣根过氧化物酶；邻苯二胺；酶催化 中圈分类号：O657．33 文献标识码：A 文章编号2002)034143605 邻苯二胺 (OPD)能够被 02氧化，辣根过氧化物酶 的缓冲溶液定容至 250n1_【，并逐级稀释。在446．3nm下测 (HRP)对此反应有强的催化作用 在所选择的酶催化反应条 定吸光度 A，平行测定三次： 件下，经过检测证明，酶催化反应只生成一种有色物质，即2， (2)配制一定浓度底物溶液，准确量取一定量于小烧杯 3-二氨基吩嗪 。本文研究了OPD-H202一HRP反应体系的 中，加人0．02ngm·L HRP溶液 1止 ，H2024mE(30％)，测 催化动力学，采用 的方法是紫外可见分光光度法。用 PE 定A随 的变化，得At曲线，在 5min内呈 良好线性关系。改 Lambda17紫外分光光度计在 446．3nm处测量体系的吸光 变HRP浓度，测一系列A—t曲线斜率b，以b对HRP溶液浓度 度 A随时间 的变化， A—曲线斜率作为测定HRP的参数， 作图，可求 K 。 结果表明，HRP催化该反应符台 M—M(Michaelis-Menten)方 (3)固定HRP量，改变底物浓度，测A随 的变化：5n1L 程。利用酶催化反应动力学分光光度法是了解 l推测和阐明 肩物 (变量)+2止 HRP(0．05ng。mLI1)+1止 02 反应机理的主要手段之一。酶催化动力学的研究无论在理论 (30％)。 上，还是在实验技术上，将对整个化学动力学作出积极 的贡 (4)固定HRP和底物浓度，改变 02用量：5n1_【底物+ 献 。 02(变量)+2p．LHRP(0．05ng·n1_【)。 1 实验部分 2 结果与讨论 1．1 仪器和试剂 PELambda一17紫外可见分光光度计 (美国，PE公司)。 2．1 分析原理 PHS-2型酸度计 (上海第二分析仪器厂)。