核内不均一核糖核蛋白A2-B1及p53蛋白诊断肺癌的价值.docVIP

核内不均一核糖核蛋白A2/B1及p53蛋白诊断肺癌的价值 作者：沈巨信 秦娥 孙健 周国忠 【摘要】 目的 探讨检测支气管肺泡灌洗液（BALF）脱落细胞中核内不均一核糖核蛋白（hnRNP）A2/B1和血细胞中p53蛋白在肺癌诊断中的价值。方法 收集经病理确诊的肺癌患者30例BALF，以30例肺部良性疾病患者BALF为对照组，采用流式细胞术（FCM），检测两组患者BALF脱落细胞中hnRNPA2/B1表达率及血中p53蛋白表达率。结果 肺癌组hnRNPA2/B1为(74.04±22.34)%显著高于肺部良性疾病组(28.03±9.01)%(P＜0.01)；hnRNPA2/B1水平与非小细胞肺癌临床TNM分期无关(P＞0.05)。肺癌组p53蛋白水平为(2.16±1.88)%显著高于肺部良性疾病组(0.93±0.51)%(P＜0.01)；hnRNPA2/B1和p53蛋白诊断肺癌的敏感性分别为86.7％、70.0％，特异性为96.7％、83.3％；联合检测hnRNPA2/B1和p53的敏感性为93.3％，特异性为100％。结论 hnRNPA2/B1和血细胞中p53蛋白水平对肺癌有辅助诊断价值，尤其对早期肺癌的诊断有重要意义，两种指标联合检测可提高诊断敏感性。 【关键词】 肺癌；核内不均一核糖核蛋白A2/B1；p53蛋白；支气管肺泡灌洗液 近年的研究表明，核内不均一核糖核蛋白（hnRNP）A2/B1在早期肺癌和癌前病变中过度表达〔1〕，比以往的细胞形态学检查有更高的敏感性。p53蛋白是肺癌相关基因p53基因编码的核酸蛋白，在癌变的早期阶段即可在血液中出现〔2〕。 文献 报道hnRNPA2/B1检测多采用免疫组化进行定性分析〔3，4〕，标本多为肺癌组织。本研究采用流式细胞术（FCM）检测肺癌患者支气管肺泡灌洗液（BALF）脱落细胞中hnRNPA2/B1及血细胞中p53蛋白水平，探讨联合检测hnRNPA2/B1和p53蛋白在肺癌诊断中的应用价值。 　 　1 材料与方法 　　1.1 对象 肺癌组2006年5月至2007年8月本院呼吸科及胸外科确诊患者，共30例，男21例，女9例，年龄48～73〔平均(60.8±10.44)〕岁，所有入选的肺癌患者均经纤维支气管镜（简称纤支镜）肺活检、经皮肺穿刺活检、手术等组织病 理学 确诊，排除接受过放、化疗或肺癌手术患者，有严重心肺功能障碍不能耐受纤支镜检查者。其中鳞癌16例，腺癌8例，小细胞癌6例；按国际抗癌联盟（UICC1997）分期标准进行临床TNM分期，I期6例，期10例，期9例，期5例。同期收集肺部良性疾病组30例为对照组，包括肺结核5例，支气管扩张6例，肺炎15例，慢性支管气炎4例，年龄46～71〔平均(58.0±11.66)〕岁，经细菌学、影像学、病理学确诊。 　　1.2 试剂及仪器 抗hnRNPA2/B1单克隆抗体试剂盒购自BD Biosciences公司，p53蛋白抗体试剂盒购自Cell Signal Technology公司。流式细胞仪由美国公司提供，型号为Coulter EPICSXL。 　　1.3 标本采集 所有受检对象均常规行Olympus T240纤支镜检查，按照中华医学会呼吸病学分会制定的肺泡灌洗常规检查方法进行支气管肺泡灌洗术（BALF）〔5〕，经负压吸引收集支气管肺泡灌洗液，离心沉淀后行FCM。纤支镜检查当日取患者肘静脉血5 ml，放置-20冰箱内保存待检。 　　1.4 检测指标 　　1.4.1 hnRNPA2/B1检测 取标本于10 ml离心管中，以2 500 r/min离心5 min，离心洗涤1次肺泡灌洗液，PBS制成悬液。加5 μl CD45PCY抗体反应5 min后，加破膜剂150 μl，摇匀后放置15 min，加FPBS离心洗涤，再加破膜剂250 μl，轻轻混匀放置5 min，加hnRNPA2/B1单抗25 μl(冰箱-20保存，取出后放室温消融)，轻摇1～2 s，放置15 min。加PSB离心洗涤，20 μl二抗IgGFITC，15 min。加PSB离心洗涤，上机。仪器方案“2006 hnrnpA2/B1”，计数1万个细胞中hnRNPA2/B1表达百分率作为观察数据。 　　1.4.2 外周血细胞内p53蛋白检测 采用双标法，取外周血2 μl，CD45PCY 10 μl+50 μl全血，避光反应15 min。PSB离心沉淀物制成悬液，用试剂intraprepTM(Immunotech公司)单细胞固定和破膜。加破膜剂150 μl，振荡后放置15 min，加FPBS离心洗涤，加破膜剂250 μl，轻轻混匀放置5 min，加10 μl p53（试剂瓶上的半量）轻轻摇匀1～2 s，放置20 min，加PSB离心洗涤，上机，仪器方案“2006p53”，计