3.第三章 基因工程载体.ppt

表达形式 单一型表达：单一基因的编码区，表达完整单一蛋白。 融合型表达：多个基因的编码区的串联体，表达出融合蛋白(fusion protein)。 融合标签蛋白：有利于蛋白纯化和检测； 融合多个目标蛋白：则类似于直接表达了一个多酶复合体一样，可减少载体构建难度，而且可以偶连两个或多个相关基因的表达。 一、质粒表达载体 表达形式 组成型表达：在组成型启动子（如：T7噬菌体启动子）的驱动下即可源源不断的表达外源基因。 适合对宿主细胞无毒的蛋白表达。 诱导型表达：在诱导型启动子和特定环境信号刺激下，外源基因的表达开放或增强。 适合有毒蛋白表达，无毒蛋白表达也可。 一、质粒表达载体 表达融合蛋白的表达载体 6 ×His（组氨酸）标签表达载体：pET系列，可在目标蛋白的N-端或C-端加上6个组氨酸的标签，能与镍等二价金属离子结合，纯化目的蛋白。 GST (glutahione S-transferase, 谷胱苷肽S-转移酶)表达载体：pGEX系列，融合蛋白纯化出来后用凝血蛋白酶切割可得到纯的目的蛋白。 一、质粒表达载体 一、质粒表达载体 (二)酵母表达载体——真核表达的首选系统 原核生物和真核生物存在翻译后修饰反应机制的差异， 真核基因在原核表达系统中难以获得有活性的蛋白。 酵母表达载体是一种穿梭表达载体：既能在大