SangerSolexa测序原理和流程.pptVIP

目前华大的Sanger测序仪有以下两种： Megabace 96孔板，读长500bps，scf格式峰图 3730/3700 384孔板，读长700bps以上，ab1格式 质量的控制 用质量值Q来判断结果的可靠性 Q=-10*logX (X是单碱基错误率) Trim掉低质量序列，使用高质量序列 一些问题 为什么GC％过高或过低的DNA会造成测序困难？ 高质量的测序结果一定可信吗？ 引物在测序模板上的结合位置不唯一会导致什么后果？ 测序模板本身不唯一会导致什么后果？ 新兴的测序方法——solexa Solexa测序方法是由solexa公司（目前已被illumina兼并）开发的低成本高通量的测序方法。于2006年发布。 目前solexa测序的主要用途是重测序和表达分析，全基因组测序组装尚处在试验过程。 反应单位：cluster A C T G Cycle N Solexa的优缺点 优点 通量大，成本低（sanger法的1/100） shotgun测序的覆盖度和随机性相对较好 缺点 目前技术尚不成熟 读长太短，拼接难度大 Solexa数据 读长：35~75bps 时间：3days/SE36run 通量：1G/run 质量：理想情况下接近Q40标准 GC敏感度：相对低 为什么说solexa是“下一代”测序技术 反应