医院EGFR突变检测经验总结.pptVIP

* * * * * * * * * * * * 转化医学 转化医学：以患者为中心，建立临床治疗和基础研究间的双向通道，从临床工作中发现和提出问题，寻找或建立相应的解决方案，然后将其应用于临床，解决临床的实际问题 测序法敏感性不足将导致假阴性结果 F Hirsch, et al. JCO 2006 C Zhu, et al. JCO 2008 T Mok, et al. Discovery Med 2009 ISEL Biomarker1 测序法阴性样本 ～200份 ARMS法重新检测 17(+) 测序法复测 7(+) BR21 后续分析2 测序法阴性样本 n=148 ARMS法重新检测 11(+) ARMS法是灵敏度更高的方法，测序法的假阴性率约为8%3 ADx-ARMS：边扩增边检测且保证突变序列的有效扩增 ARMS引物 第一轮扩增 64℃退火 保证特异性 第二轮扩增 60℃退火 保证扩增效率 扩增特异性 由一轮引物保证 突变荧光信号：FAM 内控荧光信号：HEX或VIC 外控荧光信号：FAM 阳性对照：内含阳性质粒 阴性对照：蒸馏水 内外控均检测EGFR基因2号外显子 体系中含特殊石蜡避免气溶胶污染 ADx-ARMS试剂盒的判读流程 是否污染 实验体系 DNA质量 DNA含量 结果判读 参数设置 ADx-AMRS和Dxs AR