生物选修三专题一：基因工程.docx

生物选修三专题一基因工程 基因工程 基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 DNA重组技术的基本工具 （1）“限制性核酸内切酶——分子手术刀” ①来源：主要从原核生物中分离纯化而来 （注：为什么存在于原核生物中：原核生物易受自然界外源DNA的入侵，限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，从而达到保护自身的目的。） ②种类：已经分离出大约4000种 ③★作用：1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列 2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，分成脱氧核糖和磷酸 ④★作用结果：形成两种末端：黏性末端或平末端 ⑤★常见的限制酶： EcoRI（在G和A之间切割）被限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI（在G和C之间切割）当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 ⑥限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ⑦为什么限制酶不剪切自己的DNA：细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 “DNA连接酶——分子缝合针” ★①作用效果：把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键（即把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来） 注：两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来，DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ ★②两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： 相同点：都缝合磷酸二酯键。 区别：E·coliDNA连接酶来自大肠杆菌，只能连接黏性末端； T4DNA连接酶来自T4噬菌体，能连接黏性末端和平末端，但连接平末端效率较低 ★③与DNA聚合酶作用的异同 相同点：Ⅰ作用实质：都能催化形成磷酸二酯键 Ⅱ化学本质：都是蛋白质 不同点：ⅠDNA聚合酶：不需要模板，在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，结果形成完整 的重组DNA分子，应用于基因工程。 ⅡDNA连接酶：需要模板，只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸 二酯键，结果形成DNA的一条链，应用于DNA复制。 “分子运输车”——运载体 ①作用：1）作为运载工具，将目的基因导入受体细胞中 2）在受体细胞内对目的基因进行大量复制 ②成为运载体的必要条件： 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。 4）必须是安全的 ，对受体细胞无害。 5）载体DNA 分子应大小适中，以便于提取和操作 ③载体的种类： Ⅰ细菌的质粒 Ⅱ病毒：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 ④质粒： 独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。有一至多个限制酶切个位点，供外源DNA插入其中。携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后在细胞中进行同步复制。在质粒DNA分子上有独特的标记基因（如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因）供重组DNA的鉴定和选择。 （注：实际上在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。） 例1、基因工程中，须使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。根据图示判断下列操作正确的是(　 　) A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 答案：D 例2、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题： （1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿连接。 （2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是＿＿＿末端，其产物长度为＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿