第十章现代生物技术与环境污染治理.pptVIP

第十章 现代生物技术与环境污染治理;第一节 现代生物技术的概述;1.1、现代生物技术概述;生物技术的依据和出发点： 生物在生长、发育与繁殖过程中进行物质合成、降解和转化的能力。 生物技术的核心基础是基因工程和细胞工程。 优越性： 不可取代 快速、精确 低耗、高效 副产物、副作用小 安全性好 ;二、现代生物技术的发展;1.2、现代生物技术在环境科学中的应用前景;第二节 基因工程与环境污染生物治理;2.1、基因工程分子生物学基础;2.2、基因工程的基本过程;二、基因工程载体 要将一个外源的基因送入受体细胞，需要有运输工具，这就是载体。 常用载体有：质粒，噬菌体，动植物病毒。 质粒是基因工程最常用的载体，首先由于其上有某一限制酶的单一切点，用同种酶切断的外源DNA片段插入该质粒的切口，就组成了重组DNA分子。其次由于质粒上有选择性标记，可以根据受体细胞是否具有该种标记来判断受体细胞是否获得了该重组质粒。因此质粒在基因工程中得以广泛应用。 ;三、目的基因的分离 1、从基因组直接分离目的基因 常用鸟枪法，用限制酶将某种生物的DNA切成片段并分别加入载体，对受体细胞进行转化，让外源DNA所有的片段都在宿主细胞中大量扩增，在筛选出有目的基因的转化细胞。该法有一定的盲目性，工作量大。 2、酶促合成法 将真核细胞基因转录的全部RNA提取出来，在体外经反转录酶的作用，生成与mRNA互补的DNA，即cDNA，再将cDNA酶切后载入载体，建立cDNA文库，筛选出目的基因。 或对已知核苷酸顺序的目的基因，通过聚合酶链反应（PCR）技术直接合成。 ;四、目的基因与载体的重组工艺 用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和载DNA,产生相同的粘性末端，在DNA连接酶的作用下，形成完整的重组DNA分子。 五、将目的基因导入受体 在体外完成的DNA的重组后，一般将重组的DNA分子导入受体细胞让目的基因在受体细胞中表达。基因工程中常用的受体细胞是大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞。 ;六、对目的基因的筛选和检测 将目的基因在入载体，导入受体细胞后，必须对目的基因进行检测，确认细胞中以摄入重组的DNA分子。检测方法一般有遗传学方法、原位杂交法和免疫学方法。 七、目的基因在受体细胞中的表达 目的基因在受体细胞中的表达，受到许多因素的表达。 目的基因的阅读框架必须与载体DNA的启示密码相吻合。 要有适当的启动子保证目的基因的正确转录。 基因的蛋白产物有时还需要经过修饰和加工才能成为有活性的功能蛋白。 ;2.3基因工程在环境生物处理中的应用;主要应用： 降解卤代芳烃的基因工程菌 分解尼龙寡聚物的基因工程菌 分解多糖的基因工程菌 抗金属基因工程菌 除草剂降解基因工程菌 杀虫剂降解基因工程菌 ;第三节 细胞工程与环境污染生物处理;3.1 细胞工程概述;细胞重组：在体外条件下，运用试验技术从活细胞中分离出各种细胞的结构或组件，再根据需要把它们在不同的细胞之间重新进行装配，成为具有生物活性的细胞。 遗传物质转移：基因在细胞水平上的转移。 ;3.2 细胞融合构建环境工程菌;在外界理化融合因子的诱导下，不同物种间的原生质体的质膜相互融合杂交，并在适当的条件下，融合的原生质体再生出细胞壁并恢复原来完整的细胞形态与群落形态，构成具有多种遗传性状的新物种。故可利用原生质体融合来构建新物种。 2.原生质体融合方法 亲本的选择：选择两种合适于充足的亲本菌株，选定适宜的遗传标记。 ;原生质体的制备：选用合适的酶系，在等渗溶液中溶解细胞壁。 原生质体的再生：酶解后得到的原生质体能够在等渗的培养基中重建细胞壁，恢复细胞完整形态，并能生长、分裂的过程称为再生。 原生质体的融合与融合子的检出： 化学诱导法：在得到两亲本原生质体后，等量混合两亲本的原生质体，加入适量的PEG（聚乙二醇）和钙离子溶液，保温后，洗去多余的PEG，在选择培养基上筛选出融合子。 电融合法：借助电场的作用，引发细胞融合。;二、原生质体融合来构建环境工程菌;第四节 酶学工程与环境污染生物治理;4.1 酶学工程基本概念与研究现状;4.2 固定化酶;可制成酶布、酶片、酶柱等多种形式。 二、酶的分离提纯 根据需要筛选产酶量高并已于培养和分离提取的优良菌株。 按照微生物生长和生产的最适条件进行培养，即发酵过程。 用盐析、等电电沉淀等方法对发酵液提纯。 将酶制品浓缩、结晶，并在低温下保存。;;包埋法 将酶包裹在凝胶格子或由半透明膜组成的胶囊中。 逆胶束酶法 逆胶束指表面活性剂等两性分子在有机溶剂中自发形成的聚集体。 逆胶束酶法指将酶以逆胶束的形式固定。 复合法 ;;4.3 固定化细胞;四、可逆可溶性固定化酶 酶在可溶状态下反应，反应后经简单操作可沉淀，回收利用。 通过改变pH、温度等理化参数，或由金属离子的添加、去除等方法可获得可溶、