绿色荧光蛋白GFP多克隆抗体的制备及在多种细胞中的特异.PDFVIP

第 32 卷 第 2 期 天津科技大学学报 Vol. 32 No. 2 2017 年 4 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Apr. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 绿色荧光蛋白 GFP 多克隆抗体的制备及 在多种细胞中的特异性鉴定 1 1 1 1, 2 1, 2 董 彬 ，胡贺贺 ，王 晶 ，孟德梅 ，樊振川 (1. 食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457 ； 2. 天津科技大学新农村发展研究院，天津 300457) 摘 要 ：绿色荧光蛋白是当前在生物及生物医学研究当 中应用最为广泛的一种荧光标记蛋白．为开发一种高灵敏度、 高特异性以及简单经济的 GFP 多克隆抗体，并使之适用于在跨物种细胞里表达的 GFP 蛋白进行检测 ，本文利用 gfp 基因 cDNA 全序列分别构建了带有 6 ×His 和 GST 标签的原核表达载体 pET28A-gfp 和 pGEX-2T-gfp ，并将其转入大 肠杆菌 (Escherichia coli)BL21 (DE3)细胞进行诱导表达 ，而后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)表达鉴定 ，分别 4 4 获得了相对分子质量为 2.6 ×10 和 5.2 ×10 的重组 6 ×His/GST-GFP 融合蛋白．将亲和纯化的 6 ×His-GFP 融合蛋白 ﹕ 免疫新西兰大白兔 ，采集第 5 次免疫后血清用 ELISA 测定效价为 1 32,000．抗血清依次经 Protein A 亲和纯化和 GST-GFP 抗原抗体纯化后 ，用免疫印迹实验 (Western blot)方法检测抗体特异性 ，结果表明制备的多克隆抗体能很好 地识别在莱茵衣藻 (Chlamydomonas reinhardtii)、HEK293 细胞和大肠杆菌中表达的 GFP ，对继续开展 GFP 相关研究 具有重要意义． 关键词 ：原核表达；蛋白纯化；多克隆抗体；免疫印迹 中图分类号：Q786 文献