2014-双向电泳(王).ppt

蛋白质组研究更为复杂和困难： 蛋白质数目大大超过基因数目。 蛋白质随时间和空间而变化。 功能蛋白的立体构型。 双向电泳 2-DE是目前唯一种可以仅通过一次操作解析上千种蛋白质的技术 。 第一向—等点聚焦(IEF) pH梯度载体 pI 第二向—十二烷基硫酸钠(SDS) SDS作为变性剂和助溶剂 分子量 第一向IEF 用50ml三角烧瓶按如下方法配制等电聚焦溶液： 尿素 5.5g 28.38%丙烯酰胺 1.62%甲叉双丙烯酰胺 1.33ml 10%NP40 2ml Ampholine pH4-9 0.5ml H2O 1.95ml 用玻棒充分搅拌至尿素全溶于水，不要加热使溶液温度超过30℃，然后加入 TEMED 3μl 10%过硫酸铵 7μl 摇晃使之充分混匀。 灌胶，静置 上样电泳