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生物化学实验Ⅱ实验 酶联免疫吸附试验 (8学时)一、实验目的 1. 掌握酶联免疫吸附试验的基本方法及其原理 2. 学习间接竞争法检测抗原物质的基本操作 二、实验原理 酶联免疫吸附测定 (Enzyme-Linked Immunosorbent Asay，简称ELISA)是在免疫酶技术上发展起来的一种新型免疫测定技术，是应用酶标记的抗体 (或抗原)在固相支持物表面检测未知抗原 (或抗体)的方法。 ELISA最常用的四种方法：直接法测定抗原；间接法测定抗体；双抗体夹心法测定抗原；竞争法测定抗原。 竞争法ELISA的过程主要包括：抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被，封闭未被占据的吸附位点后，加入一定量特异性抗体和样品，吸附的抗原和样品中的抗原与抗体竞争结合。再加相应酶标记抗体，生成抗原-抗体-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，各孔的吸光度值与样品中抗原的浓度成反比。为提高检测的灵敏度，通常在酶标板上加入样品和抗体之前，先将两者以一定比例混合，于4 ℃预孵育16 h左右。 酶联免疫吸附试验是利用抗原-抗体的免疫学反应和酶的高效催化底物反应的特点，具有生物放大作用，所以反应灵敏，可检出浓度在ng水平。酶联免疫吸附试验中所使用的试剂都比较稳定，按照一定的实验程序进行测定实验结果重复性较好，有较高的准确性。酶联免疫吸附法成本低，操作简便，可同时快速测定多个样品，不需要特