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实验六 邻二氮菲分光光度法测铁 一、实验目的 1．掌握邻二氮菲分光光度法测铁的原理及方法。 2．学习吸收曲线的绘制方法，正确选择测定波长。 3．学会标准曲线的绘制方法，计算分析结果。 4．掌握分光光度计的使用方法。 1 物质对光的选择性吸收： 分光光度法（Absorption Photometry）：基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。 广泛用于无机物和有机物的定性和定量分析。 2 光谱分区 通过测量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该物质在测量波长范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光度吸收能力，称为吸收光谱。 不同的物质因其分析结构不同而具有不同的吸收曲线； 吸收曲线是吸光度法选择测量波长的依据。 光吸收的基本定律 朗伯－比尔定律：A=Kbc 比色皿的使用方法： ①拿取比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃 面，不要触碰比色皿的透光面，以免沾污。 ②清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。每次做完实验时，应立即洗净比色皿。 ③比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。 ④测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液润洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。  三、实验步骤 取7个50mL比色管，分别加入0.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL铁标准溶液和10.00mL水样，然后加入1mL盐酸羟胺(?)，2.00mL邻二氮菲，5mLNaAc溶液(?)，每加入一种试剂都应初步混匀。用去离子水定容至刻度，充分摇匀，放置10min。 2、标准曲线（工作曲线）的绘制 四、注意事项： 1 .试样和标准曲线的样品同时测定。 2 .试剂的加入要使用同一顺序，并且应用移液管加样。 * * * * * 环境科学与工程学院 光在与物质作用时，物质可对光产生不同程度的吸收(呈现的颜色）。 物质的结构决定了物质在吸收光时只能吸收某些特定波长的光（选择性）。 例如，当一束白光（复合光）通过硫酸铜溶液时，水合铜离子中的电子发生跃迁，选择性的吸收复合光中的黄光，其他颜色的光不被吸收而透过溶液，故溶液呈现出黄色的互补色——蓝色。我们通常见到的有色物质，都是由于他们吸收了可见光的部分光，呈现出吸收光颜色的互补色。 一 分光光度法的原理 绿 500～580 白光 紫 400～450 青蓝 480～490 橙 600～650 青 490～500 红 650～750 黄 580～600 蓝 450～480 光的互补色示意图 能 量 小 200nm 400nm 750nm 大 波 长 光谱区域 紫外光区 可见光区 红外 分析方法 紫外分光光度法 可见分光光度法 50um 红外分光光度法 紫、蓝、青、绿、黄、橙、红 （所吸收光的波长区域不同） 紫外—可见分光光度法是历史悠久、应用最为广泛的一种光学分析方法。 3 吸收曲线 吸 收 曲 线 图 400 500 600 0.100 0.200 0.300 0.400 A--吸光度 K--摩尔吸光系数 C--被测物浓度 b--液层厚度（光程长度） 朗伯比尔定律的物理意义：当一束平行光垂直通过 某一非散射的吸光物质时，其吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）及光程长度（b）成正比关系 优点：结构简单、价格低廉、适用于固定波长下的定量分析 缺定：由于光源和检测系统的不稳定会产生误差；无法进行吸收光谱的自动扫描； 单色器 吸收池 R S 光源 检测器 4.分光光度计 在pH2—9的溶液中，Fe 2+与邻二氮菲生成稳定的桔红色络合物Fe(Phen)3 2+，其λmax≈510nm，ε=1.1×104L·mol-1·cm-1，可用吸光光度法进行测定。 二 实验原理 1、吸收曲线得绘制 选用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液，取4号比色管试液，选择440－560nm波长，每隔10nm测一次吸光度，以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。 吸光度 波长nm 560 550 540 530 520 510 500 490 480 470 460 450 440 绘制