四膜虫彗星实验在环境水质检测中的应用_王丽.pdfVIP

四膜虫彗星实验在环境水质检测中的应用 王丽,等 四膜虫彗星实验在环境水质检测中的应用 王丽, 鲁志松, 丁书茂, 杨旭 (华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,武汉 ) 430079 摘 要:介绍四膜虫作为生物材料在彗星实验水质检测中的应用,探讨了将单细胞原生生物应用于彗星实验在环境水质检测、遗传 毒性检测等方面的应用优势和发展前景。研究结果表明:过氧化氢浓度与细胞损伤之间呈现良好的剂量 效应关系,东湖水和长江水未 - 造成四膜虫DNA的损伤,印染厂污水对细胞有严重的损伤作用,可能会影响正常的生态环境。 关键词:分子生物学; 彗星实验; 原生生物; 四膜虫; 水质检测 中图分类号: 文献标识码: 文章编号: X830.2 A 1003-6504(2006)05-0031-03 四膜虫是一种真核单细胞原生动物,由于其生长 技大学同济医学院提供。 迅速,生活周期短,取材容易,培养方法简单,目前 长江水采集于武汉市中华路码头;东湖水采样于 已作为标准检测生物被广泛应用于毒性检测、细胞 武汉东湖风景区;污水采集于武汉某印染厂排放污 凋亡和水质检测中。彗星实验( ),又称 水。分别采样于 年 月 日,静置 将泥 cometassay 2004 6 12～14 1d 单细胞凝胶 电泳 (singlecellgelelectrophoresis, 沙沉降后用于彗星实验。 [1] SCGE)是由Ostling等 在 1984年提出,后经 Singh 1.3 实验方案 [2] 等 进一步完善的一种快速、敏感、经济的检测单个 1.3.1 四膜虫的培养 细胞 损伤的技术。目前,该技术已被广泛应用 将四膜虫接种于培养液( 蛋白胨, 酵母粉, DNA 15g 5g 于放射生物学、遗传毒理学、 损伤与修复的检 葡萄糖溶于 双蒸水)中,在 条件下培 DNA 1g 1000mL 30℃ [3] 测、细胞凋亡机制的研究等诸多领域 ,并得到不断 养72h。实验前,让四膜虫培养液在3500r/min的条件 的发展。其基本原理是细胞经裂解液破坏细胞膜, 下离心20min,使之沉降。弃去上清液,将沉淀重悬浮 溶解蛋白质、 等成分,暴露 ;然后在碱性 为原培养液体积的 。 RNA DNA 1/10 条件下,DNA解螺旋,DNA的断链被释放,在电场 1.3.2 HO对四膜虫的损伤作用 2 2 的作用下,断链移向正极,从而形成彗星状影像。故 取 节制备的四膜虫细胞悬液分装于 支 1.3.1 4 在理论上彗星实验可用于真核细胞 损伤