生物工程导论.pptVIP

对植物抗病防卫反应信号转导与分子跨核运输关系的研究 组员： 罗旭明 植保094班 胡雅楠 植保094班 徐峻峰 植保094班 郭秋霞 植保094班 秦丹丹 植保094班 徐中研 植保094班 一、研究背景 有条不紊的核质转运是真核生物对信号传导进行精密调控的重要途径，也是植物控制防卫反应信号传导的重要机制。植物调控抗病性的许多蛋白质，特别是转录因子，在核糖体上合成之后都需要进入细胞核才能发挥作用，跨核运输因此成为防卫反应信号在细胞内传导的一道关卡。在分子跨核运输的过程中，载体蛋白、核孔蛋白和小G蛋白Ran执行无可替代的功能。 二﹑研究意义 通过研究参与植物抗病防卫反应信号转导传导因子的跨核运输，探讨相关蛋白对信号转导的作用，以便从强化有利信号转导﹑抑制不利信号转导两方面，为作物抗性改良及分子设计育种提供理论依据和技术支持。 三﹑研究目标 1.明确对植物抗病防卫反应信号转导起关键作用的核输入载体蛋白与核孔蛋白的种类 2.揭示核输入载体蛋白和核孔蛋白在介导NPR1、ERF1和COI1跨核运输的过程中是否存在合作或对抗的关系，明确这种功能互作关系对水杨信号传导与植物抗病性的影响。 四﹑研究内容 1.分子跨核运输的选择性 2.分子跨核运输的关键环节： ①细胞质内核输入载体蛋白-货物的识别﹑结合 ②复合体在核孔上锚定并与核孔蛋白结合 ③货物在细胞核的释放 3.分子跨核运输在防卫反应不同激素信号传导通路中的作用 4.分子跨核运输对不同防卫反应信号通路交叉调控的影响 分子跨核运输的选择性:NLS代表含核定位信号(nuclear localization signal)的货物蛋白； NUP50 = 一种核孔蛋白；CAS = 核输出因子(nuclear export factor)；NTF2 = 核运输因子2 (nuclear transport factor-2)。货物-IMPα-β按图示的过程进入细胞核；完成跨核运输任务后，Ran-IMPα、Ran-IMPβ复合体返回细胞核，后者借助CAS (a)；NTF2帮助Ran进行核质穿梭(b)。 五﹑研究方法,技术路线 NPR1，ERF1与IMP互作测定 酵母双杂交筛选→Pull-down测定→瞬时表达BiFC实验 介导NPR1，ERF1跨核运输的IMP种类鉴定。 构建转化载体 上述转基因材料用水、SA、ACC处理或使用→激光共聚焦显微镜观察荧光蛋白亚细胞分布动态→水杨酸和乙烯含量测定→NPR1、ERF1、MYB44跨核竞争或协调关系分析 课题组的实验流程 我们在这个课题组主要参与的是突变体植株的筛选： 1.种植拟南芥。 2.待拟南芥发育 30天左右，喷洒激素MGA,ACC或INA。 3. 喷完激素48小时后喷洒DC3000、ECC菌液 4. 3天后，观察拟南芥的发病情况，并拍照。 图为DC3000在拟南芥5个核孔蛋白基因突变体与野生型上引起的症状 * * *