2014届高三课堂新坐标生物一轮复习课件人教版选修部分选修3第1课时基因工程.pptVIP

【考情播报】 3年8考(2012·新课标全国卷T40、福建卷T32、山东卷T35；2011·海南卷T31、山东卷T35、四川卷T5；2010·浙江卷T2、天津卷T7等) 1．DNA重组技术的“分子手术刀” (1)“分子手术刀”即限制性核酸内切酶。 (2)来源：主要从原核生物中分离。 (3)功能：识别特定核苷酸序列、切割磷酸二酯键 (4)结果：产生黏性末端或平末端。 2．“分子缝合针”——DNA连接酶 3.“分子运输车”——载体 (1)种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 (3)载体的作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 4．与DNA相关的酶 (1)五种DNA相关酶的比较 (2)限制酶和DNA连接酶之间的关系图示 ①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 ②DNA连接酶起作用时不需要模板。 1．切割质粒需使用限制酶1次，切割目的基因则需要使用相同的限制酶2次。因为质粒是环状DNA，而目的基因在DNA分子链上。 2．质粒DNA分子上限制酶切割位点的选择必须保证至少有一个标记基因是完整的，如果标记基因全部被切开则不便于鉴定与选择。 1．(2012·上海高考)如图所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1(3.7 kb,1 kb＝1 000对碱基)上相应的E－F区域(0.2 kb)，那么所形成的重组质粒pZHZ2(　　) A．既能被E也能被F切开 B．能被E但不能被F切开 C．既不能被E也不能被F切开 D．能被F但不能被E切开 【解析】　用限制酶从基因组DNA上切下目的基因，并取代质粒pZHZ1(3.7 kb,1 kb＝1 000对碱基)上相应的E－F区域(0.2 kb)，用DNA连接酶连接后形成重组质粒，则在重组质粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位点，形成的重组质粒pZHZ2既能被E也能被F切开。 【答案】　A 【考情播报】 3年7考(2012·福建卷T32、天津卷T7、海南卷T31、上海卷T57；2011·山东卷T35、安徽卷T31；2010·浙江卷T2等) 1．目的基因的获取途径 (1)从基因文库中获取：包括基因组文库和cDNA文库等。 (2)人工合成目的基因的常用方法 ①化学合成法：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。 ②反转录法：以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。 (3)通过PCR技术扩增目的基因 目的：利用DNA复制的原理在体外特异性的复制某DNA片段以获得呈指数方式增加的目的基因。 2．基因表达载体的构建 (1)基因表达载体组成 ①启动子、终止子：是基因转录的起点和终点，在转录过程中起调控作用。 ②标记基因：作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素抗性基因。 ③目的基因：能控制特定性状的目的基因。 (2)基因表达载体的构建步骤(如图示) 3．将目的基因导入受体细胞 1．只有第三步“将目的基因导入受体细胞”没有发生碱基互补配对，其余三步中都涉及碱基互补配对。 2．切割目的基因和载体应用同一种限制酶。 3．目的基因与载体的连接方式有多种，如目的基因—目的基因、目的基因—载体、载体—载体等。 PCR扩增技术与DNA复制的比较 2．(2011·安徽高考)家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药。 (1)进行转基因操作前，需用__________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。 (2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的__________和__________之间。 (3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg2＋)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、 __________和__________。 (4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以__________，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。 【解析】　(1)动物细胞间借胶原蛋白连在一起，故可用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理幼蚕组织，获得单个细胞；(2)来自cDNA文库的干扰素基因片段是通过逆转录得到的，其缺少非编码区上的启动子和终止子，为使其高效表达，必须把其插入表达载体的启动子和终止子之间；(3)利用PCR技术体外扩增目的基因时，必须加2种引物和耐高温的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)；(4)多孔的中空薄壁小玻璃珠可以扩大细胞贴壁生长的附