喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立.pdf

贵州农业科学 2017，45(2)：5～9 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号]IOOI一3601(2017)02—0042—0005—05 喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立 孙 涛 一，孔德英 ，滕少娜 。，邓朝晖 。 (1．重庆出入境检验检疫局，重庆 400020；2．国家中药材物种鉴定及质量安全检测重点实验室，重庆 400020) [摘 要]为寻求喀斯特炭疽茵的快速检测方法 ，利用TaqMan探针实时荧光定量 PCR技术 ，以喀斯特 炭疽茵基 因组 中的ACT基 因为靶序列设计并筛选特异性 引物探针 ，通过特异性、灵敏度、重复性试验建立 喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光 PCR检测方法。结果表 明：建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复 性稳定性较好，最低检测限为0．2PgDNA／反应，标准曲线的线性关系 良好 ，相关系数为 0．998。该方法操 作简便 ，可用于进 出境 口岸喀斯特炭疽茵的检疫。 [关键词]喀斯特炭疽菌；检疫 ；鉴定 ；TaqMan实时荧光 PCR [中图分类号]$41～30 [文献标识码]A EstablishmentofaTaqManrea1．time POR TestMethodfor Detecting Colletotrichum karstif ’ SUN Tao一，KONG Deying”，TENG Shaona ，DENG Zhaohui (1．ChongqingEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Chongqing400020；2．StateKeyLaboratoryof ChineseHerbajMedicineSpeciesIdentificationandQualitySafetyTesting，Chongqing400020，China) Abstract：TheTaqM an real—time fluorescencePCR detection methodofColletotrichum karstiiwas establishedbyusingtheTaqManreal-timefluorescencequantitativePCR technology，takingACT geneas thetargetand screening specificprimersand probeafter specificity，sensitivity andrepetition teststo exploretherapiddetectionmethodofColletotrichum karstii．Results：Theminimum detectionlimitofthe establishedTaqM anreal—timefluorescencePCR detectionmethodwithstrongspecificity，highsensitivity， stablerepeatability，goodlinearrelation (0．998)andsimpleoperationiS0．2PgDNA，whichindicatesthe establishedTaqM anreal—timefluorescencePCR detectionmethodcan beused in Colletotrichum karstii； quarantineatentry—exitports． Keywords：Colletotrichum karstii；quarantine；identification；TaqM anreal—timefluorescencePCR 炭疽菌属 (Colletotrichum)真菌是一类全球分 适生性强 ，可通过带病种苗、花卉、果实等进行远距 布的植物病原菌 ，其寄主范围极广 ，包括豆科 、十字 离传播 ，对我国果树 、蔬菜和园林植物的生产和生态 花科、茄科等几十个属 的几百种植物 ，能侵染寄主植