固定剂的配方及性能介绍.doc

一些固定剂的配方及性能介绍 固定，就是用某种方法双最快的速度将细胞杀死并保持组织及细胞原有的形态结构及其组成。固定在组织制片中极为重要，因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶（水解酶）会使蛋白质分解为氨基酸渗出细胞，使细胞溶解破坏，组织变形，在无冰藏的条件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的诊断。 组织固定的目的为1、迅速防止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，以保持和细胞与正常生活时的形态相似；2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶解物质，以保持它原有的结构与生活时相仿；3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折光率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察；4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片；5、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有的形态结构；经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。为了能够达到固定的目的，固定剂必须具备以下的性质和条件：1、迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织细胞形态不至于有较大变化；2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定；3、使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变；4、在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理，而使固定后的原生质变形；5、尽可能避免使组织膨胀或收缩（不致改变原生质原来的体积）；6、能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来；7、增加细胞内含物的折光度，易于鉴别，增加媒染作用和染色作用；8、使细胞变硬，适于切片，但又不使材料太坚硬或松脆；9、使组织充分固定，便于保存。[1][2] 下面我们介绍中华医学会病理分会推荐的几种常用固定剂的性能[3]： 1、 4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液 配方：甲醛（40%）100ml，无水磷酸氢二钠6.5g，磷酸二氢钠4.0g，蒸馏水900ml。 福尔马林不能使蛋白质及核蛋白凝固，但能保存脂类，可用于高尔基体、线粒体的固定，是糖的保护剂。对大多数抗原物质保存较好，对细胞膜的通透性有影响，可能使某些大分子抗原失去活性。福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少。 2、乙醇-甲醛（酒精-福尔马林，AF）固定液 配方：甲醛（40%）100ml，95%乙醇900ml。 酒精可以凝固蛋白质，但不能沉淀核蛋白，能溶解大部分脂类。酒精渗透速度快，胶水性强。除了固定作用外，还具有硬化和脱水作用。缺点是渗透力差，能使组织收缩，易挥发，容易吸收空气中的水分。酒精是一种还原剂，能被氧化成醋酸，不能与铬酸、锇酸及重铬酸钾等氧化剂配合成固定剂。 AF液兼有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞固定好。 3、Carnoy固定液 配方：无水乙醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml。 醋酸，又称乙酸、冰醋酸。固定组织常用5%的溶液，能沉淀核蛋白，不能沉淀白蛋白、球蛋白，不能保存糖，也不能固定脂质，可使染色体保存较好。其穿透力强，渗透快。其缺点是使组织膨胀，特别对胶原纤维及纤维蛋白，高浓度的醋酸易破坏线粒体和高尔基体。 Carnoy液能固定胞浆和胞核，尤其适宜于染色体等。常用于粮原及尼氏体的固定，对显示DNA、RNA的效果好。固定液可防止乙醇的硬化及收缩作用，增加渗透力，特别适合外膜致密不易透入的组织。 4、Zenker固定液 配方：升汞5.0g，重铬酸钾2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100ml。 升汞（HgCl2），能使蛋白质及核酸沉淀，对脂类及多糖无固定作用，也不破坏脂类及多糖。其渗透速度快，穿透力较弱，对组织收缩较小。组织固定后染色质强烈与碱性染料结合，胞质内的结构也能被酸性或碱性染料着色。 重铬酸钾是强氧化剂，和合固定材料的浓度为1-3%，本身不能沉淀蛋白质，但可使蛋白质产生沉淀，未酸化的虽不能沉淀蛋白质，但可使蛋白质变为不溶性，保持与生活状态相仿，能固定类脂体，所以可以固定高尔基体、线粒体、脂肪，能溶解染色体，所以对核染色不良。酸化的使胞质及胞核沉淀呈网状，保存染色体，破坏线粒体。 Zenker固定液能使细胞核和细胞浆染色较为清晰。对细胞质固定好，显示某些细胞质内特殊颗粒有独特优越性，对胰岛和垂体前叶各种细胞的显示效果好，对骨髓等造血器官的固定效果好，红细胞可得到良好保存，对心肌的闰盘保存也有良好效果。 5、Bouin固定液 配方：饱和苦味酸水溶液（约1.22%）75ml，甲醛（40%）25ml，冰醋酸5ml。 苦味酸适合固定材料的浓度为饱和水溶液，能沉淀蛋白，对脂类无作用，不能固定多糖，渗透力弱，对组织收缩明显，不使组织硬化，固定组织容易着色。 Bouin固定液渗透力强，对组织固定均匀且收缩小，染色效果好，核着色鲜明，但细胞质着色差。用于固定大多数器官和组织，适用于结缔组织染色。