4-培养基的灭菌.ppt

第三节 培养基的灭菌设备 发酵工业需纯种培养，若在培养过程中污染杂菌，则会导致： ①基质或产物因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降； ②产物的提取或分离困难，造成收率降低或使产品的质量下降； ③改变反应介质的pH，使生物反应发生变化； ④分解产物，使生产过程失败； ⑤发生噬菌体污染，使生产过程失败。 为了保证培养过程的正常进行，防止染菌的发生，对大部分微生物的培养，包括实验室操作和工业生产，均需严格的灭菌。 液体培养基的灭菌的方法有： ⑴利用热能； ⑵利用化学药物； ⑶利用机械方法，例如过滤、离心分离、静电等方法； ⑷采用x—射线、β—射线、紫外线、超声波、微波、电磁波等对物料进行灭菌。 我国目前大都采用蒸汽加热灭菌。也称为湿热灭菌法。 其优点是： ⑴可采用高温短时间，培养基的营养成分的破坏较少， ⑵便于自动化，提高生产率。 （一）培养基热灭菌的动力学 在一定温度下，活的微生物杂菌细胞（包括杂菌芽孢），受热死灭过程与一级化学反应中反应物浓度随时间的减小相类似。 杂菌是一个复杂的高分子体系，其受热死亡是因蛋白质高分子物质的不活性化，结果导致蛋白质变性。这种反应同属于一级反应。 1．对数残留公式与理论灭菌时间 实验证明，杂菌在一定温度下受热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学，即： N：任一时刻的活细菌浓度（个/L或个/mL） t： 灭菌时间（min或s） k：反应速率常数（min-1或s-1） 上式也可以解释成微生物减少的速率与任一瞬间残留的菌数成正比。 2．十进衰减时间与反应速度常数k 3、温度对k的影响 微生物的热死灭动力学接近一级反应动力学；它的反应速率常数k与灭菌温度T的关系可用阿累尼乌斯方程表征 （二）培养基分批灭菌 （三）培养基连续灭菌 培养基连续灭菌的优点: (1)培养液受热时间短，营养成分破坏较少； (2) 设备利用率高； (3) 操作方便。适用于自动控制。 缺点:设备比较复杂，投资较大。 1、连消塔加热的连续灭菌流程（如下图 ） 待灭菌料液由连消泵送入连消塔底端，料液在此被加热蒸汽立即加热到灭菌温度，由顶部流出，进入维持罐，维持8～25min，后经喷淋冷却器冷却到生产要求的温度。 连消塔加热的连续灭菌流程 2、喷射加热的连续灭菌流程 料液高速喷出，将蒸汽吸入与之混合。 培养基在指定的灭菌温度下逗留的时间由维持段管子的长度来保证。 3、薄板换热器连续灭菌流程 培养液在设备中同时完成预热、加热灭菌、维持及冷却的过程。 由于待灭菌培养液的预热过程同时作为灭菌培养液的冷却过程，因而节约了能耗。 思考题 1、液体培养基为何要灭菌？灭菌的方法有哪些？ 2、请你推导出液体热灭菌的对数残留公式，并与空气过滤除菌的对数穿透定律公式作比较，说明其意义和应用范围。 3、为何培养基灭菌时选择高温短时？试应用培养基灭菌动力学方程式说明之。 4、培养基连续灭菌的有何优点？阐述培养基连续灭菌流程设备组成及其作用。 * * 取边界条件t0=0，N=N0，对（1）积分得 上述公式即为液体热灭菌的 对数残留公式和理论灭菌时间公式。 ⑵ k 值是判断微生物受热死亡难易程度的基本依据。它的大小表示微生物受热死灭的快慢。k值愈小，t 值越大，则该微生物愈耐热。 由于细菌芽孢的k值比生长期细菌和霉菌的k值小得多，故湿热灭菌的程度要以杀死细菌的芽孢为准。 式中，R——摩尔气体常量， A及Ea分别叫指前因子（或频率因子）及活化能。 [Ea ]=J/mol ， A 的单位与 k 相同。 ⑴从以上方程可以看出： ①活化能E的大小对k值有重大影响。其它条件相同时，E越高，k越低，热死速率越慢。 ②不同菌的孢子的热死灭反应E各不相同。 ③反应的E越高，lnk 对T 的变化率越大，即T的变化对k的影响越大。 ⑵试验表明，细菌孢子热死灭反应的E很高，而某些有效（营养）成分热破坏反应的E较低。 培养基灭菌时将温度提高到一定程度，会加速细菌孢子的死灭速度，稍微增大对有效成分的破坏速度。但由于灭菌时间的显著缩短，有效成分的破坏反而减少。 间歇灭菌的操作（如图）： 发酵罐的空气分过滤器灭菌并用空气吹干。 进料完毕，开搅拌以防料液沉淀。 开夹套蒸气阀，使料液预热升温至80℃，关闭夹套蒸气阀门。 开空气、出料、取样阀门，进蒸气，开排汽阀，包括小辫子（进料管、补料管、接种管和排汽管）。当升温至110℃左右，控制进出汽阀门直至温度121 ℃，保温30min。 保温结束后，关过滤器排气阀、排汽阀、进汽阀；关夹套下水道阀；开冷却水进回水阀。 待罐压低于过滤器压力时，开空气进气阀通入无菌空气，通入冷却水，将培养基温度降至培养温度。 灭过菌的培养基通过一膨胀阀进入真空冷却器而急速冷却。 ※板式换热器 薄板冲压成特殊