肺结核实验室诊断(马小玲).pptVIP

结核分枝杆菌的试验室诊断 安徽省立医院检验科 马筱玲 黛玉脸色苍白， 瘦骨嶙峋，经不断咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场哀怨凄绝的爱情故事。 结核病实验室诊断方法介绍 概 述 结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源的主要途径和手段，也是结核病确诊和制订抗痨方案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。 由于结核菌的遗传特性决定其生长周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。 实验室诊断方法 病原学诊断 辅助诊断 病原学诊断 一、涂片抗酸染色镜检法， 二、液基夹层杯结核杆菌检验 三、荧光染色法 四、培养法 五、液体培养＋显微镜观察药敏试验 六、快速培养检测法， 七、色谱法 八、分子生物学法 九、噬菌体生物扩增法 一、涂片抗酸染色镜检法： 国内大多采用厚涂片，比薄涂片法可提高阳性率；涂片萎尼抗酸染色法能保存较久，可备复查； 因费时、繁琐，综合医疗单位常因重视不够，致涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳率可达到30%。 国外痰涂片阳性率可达30%～40%，反复多次查，可增加到65%～75%； 痰菌假阴性原因 病变是封闭或开放； 病变性质和其中能够排出的菌量和排出时间间歇； 结核分枝杆菌形态多样性； 二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理 将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混悬液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心机离心将混悬液中细菌或细胞牢固附着基片上，并在夹层杯中直接染色后取出基片在载波片上封片，置显微镜下观察。 三、荧光染色法： 是涂片法中阳性率较高，较快速的方法， 集菌与荧光染色相结合，则荧光显微镜下的抗酸杆菌阳性率可达50%， 荧光法的缺点： 假阳性率较高， 保存时间短，不到4个月 四、培养法 一般都用改良罗氏固体培养基 接种后第3第7天观察，以后每周观察一次菌落生长情况，第8周若仍无生长，报告为阴性。 优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验. 缺点：诊断周期长，最快也需要6周。 有一定的污染率 培养假阴性的原因 个别细菌营养要求的特异性； 细菌和细菌营养代谢异质性； 细菌培养前处理对细菌活性影响； 分枝杆菌药物敏感性试验 绝对浓度法检测分枝杆菌药敏实验是采用含药罗氏培养基进行的。常用药物终浓度（μg/ml） ____表 1 绝对浓度法含药培养基中的药物终浓度_____ 药 物 浓 度（μg/ml） 低浓度 高浓度 异烟肼 　 1μg/ml　　 10μg/ml 利福平　　　　 1μg/ml　 10μg/ml 链霉素　　　　10μg/ml　 100μg/ml 乙胺丁醇　　 5μg/ml　 50μg/ml 对氨基水杨酸 1μg/ml　　 10μg/ml 氨硫脲 10μg/ml　 100μg/ml 乙硫异烟胺 25μg/ml　 100μg/ml 卡那霉素 10μg/ml　 100μg/ml 卷曲霉素 10μg/ml　 100μg/ml 紫霉素 10μg/ml　 100μg/ml 氧氟沙星 5μg/ml　 50μg/ml 左氧氟沙星 5μg/ml　 50μg/ml 环丙沙星 5μg/ml　 50μg/ml 司帕沙星 5μg/ml　 50μg/ml 力克肺疾 1μg/ml　　 10μg/ml 丁胺卡那 10μg/ml　 100μg/ml 检测方法 1．菌悬液的制备 2.接种及培养 3.结果判定与报告 敏感（一）： 含药培养基上无菌落生长。 报告菌落数：当含药培养基上菌落数在20个以下时，报告菌落个数。 耐药（1+）： 含药培养基上菌落数约占斜面面积1/4； 耐药（2+）： 含药培养基上菌落数约占斜面面积1/2； 耐药（3+）： 含药培养基上菌落数约占斜面面积3/4； 耐药 (4+)： 含药培养基上菌落呈菌苔样生长。 五、液体培养＋显微镜观察药敏试验 是2000年建立的一种痰标本液体培养结合显微镜观察技术。其原理是MTB含有索状因子，因此其在液体培养基中生长