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第二章 生物制药工艺技术基础 第一节 生化制药技术工艺基础 第二节 微生物制药工艺技术基础 第三节 生物技术制药工艺技术基础 第四节 生物制药中试放大工艺设计 第一节 生化制药技术工艺基础 一、生物材料与生物活性物质 二、生物活性物质的提取 三、生物活性物质的浓缩与干燥 四、生化物质的分离纯化方法 （一）生物活性物质的来源 动物脏器 血液、分泌物和其他代谢物 海洋生物 植物 微生物 开发生物新资源 动、植物细胞的大规模培养； 应用基因重组技术建立“工程菌”和“工程细胞”。 小肠： 是消化和吸收的场所，可制备糖蛋白、核 苷酸酶、溶菌酶、胃肠道激素; 猪小肠粘膜：是生产肝素的原料，用十二指肠为 原料可制取肝素； 脑垂体：主要是各类激素，已用垂体为原料生产的药物有缩宫素注射液(OX)、加压素及助产素等； 心脏：用心脏生产的药物主要有细胞色素C、辅酶Q10和心血通注射液； 其他动物脏器:如肺、肾、胸腺、扁桃体、眼 球、鸡冠等也都是重要的生物制药原料。 1．酸、碱、盐水溶液提取方法 —水溶性、盐溶性物质 如胰蛋白酶用稀硫酸提取，肝素用pH9的3.0%氯化钠溶液提取。 —盐解 某些与细胞结构结合牢固的生物分子，采用高浓度盐溶液（40mol/L盐酸胍，8mol/L脲或其他变性剂)提取 （5）反胶束提取：表面活性剂分散于连续的有机相中自发形成的纳米尺度的一种聚集体。 选择性高 蛋白类提取 最大限度地保持了蛋白质的生物活性 提取后及时除去表面活性剂 3.有机溶剂提取 (1)固-液提取 (2)液-液萃取 (2)液-液萃取： 液-液萃取是利用溶质在两个互不相溶溶剂中的溶解度的差异将溶质从一个溶剂相向另一个溶剂相转移的操作。 影响因素：分配系数和溶剂用量 常采取分次加入溶剂 ，连续多次提取来提高萃取率 薄膜蒸发 ②盐析 加入中性盐如硫酸铵、氯化钠等可以使一些生化物质的溶解度减少，这种现象成为盐析。 ④乳化 在液-液萃取时，常发生乳化作用，使有机溶剂与水相分层困难。去乳化的常用方法有：过滤与离心，轻轻搅动，改变两相的比例；加热、加电解质、加吸附剂。 提取用溶剂系统应避免过酸过碱，多数生化物质在中性件下较稳定，pH值一般应控制在4～9范围内， 为了增加目的物的溶解度，往往要避免目的物的等电点附近进行提取。 合理地选择溶剂系统的pH值，不但直接影响目的物与杂质溶解度，还可以抑制有害酶类的水解破坏作用，防止降解，提高收率。 * * 防止某些物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏，加巯基等保护蛋白质和酶催化活性基团 加某些还原剂如半胱氨酸，?－巯基乙醇等防止蛋白质和酶催化活性基团氧化 加EDTA防止蛋白质和酶活性受重金属的抑制. 针对生物材料和目的物的性质选择合适的溶剂系统与提取条件; 目的物与主要杂质在溶解度的差异以及它们的稳定性; 在提取过程中增加目的物的溶出度，尽可能减少杂质的溶出度。 注意事项: ①蛋白质类药物要防止其高级结构的破坏，即变 性作用； ②对酶类药物的提取要防止辅酶的丢失 ③多肽类及核苷酸类药物需注意避免酶降解作用 ④脂类药物防止氧化，减少与空气接触。 活性物质的保护措施： （1）缓冲盐系统：防止pH大幅度变化 （2）保护剂：还原剂、酶的底物、金属鳌合剂 （3）抑制水解酶的作用 加EDTA除去重金属抑制酶活性 选择热变性,使蛋白酶变性 添加酶抑制剂 （4）其它保护措施（防过冷、过热、酸、碱、紫外线、搅拌、高频振荡等） （一）生物活性物质的浓缩 生物活性物质提取液在进一步分离、提纯前，根据物料性能可采用不同浓缩方法，除了常规的蒸发和减压浓缩外，由于多数生化活性成分对热不稳定，因此常采取一些较为缓和的浓缩方法。 三、生物活性物质的浓缩与干燥 1、盐析浓缩 2、有机溶剂沉淀浓缩 3、用葡聚糖凝胶（Sephadex）浓缩 4、用聚乙二醇透析浓缩 5、超滤浓缩 6、真空减压浓缩与薄膜浓缩 超滤工作原理示意图 （二）生物活性物质的干燥 1、干燥概述 干燥是使物质从固体或半固体经除去存在水分（表面水，毛细管中的水）、细胞内的水或其它溶剂，提高药物或药剂的稳定，以利于保存和运输。 2、干燥方法 减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥、膜式干燥、气流干燥及红外线干燥。 冷冻干燥 使被干燥的液体在极低的温度下，冷冻成固体；然后，在低温、低压下利用水的升华性能，使冰升华汽化而除去，以达到干燥的目的； 冷冻干燥法适用于绝大多数生物产品的干燥和浓缩，尤其是不耐热的生物药物，可以最大限度地保证生物产品的活性。 四、生化物质的分离纯化方法 1.生物制药中分离制备方法的特点 生物材料组成复杂 含量极微