miR鄄10b对MCF10A细胞表达N鄄糖链.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2017, 44(4): 338~346 细胞表达 糖链 miR 10b MCF10A N 及 糖链的影响* O 东 郭 佳 武艳丽 关 锋** ( 南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室，无锡214 122) 摘要 蛋白质糖基化是蛋白质翻译后修饰之一，对蛋白质功能有重要的调节作用，而异常糖基化在肿瘤的发生、发展以及癌 细胞转移过程中起到关键作用 MiRNAs 在癌症的发生发展过程中同样起到非常关键的作用，但其如何影响糖基化进而在肿 瘤恶性转化过程中发挥生物学功能的研究甚少 本文将miR-10b 在人正常乳腺上皮细胞MCF 10A 中过表达， 用糖类相关 基因芯片系统筛选了发生显著变化的糖基转移酶；随后 用本实验室建立的N- 糖链及O- 糖链测定方法，分析糖链水平的表 达差异；最后对关键糖基转移酶基因Fut8 、MGA T3 及OGT 通过荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和凝集素免疫印迹进行了验 证，为研究miR-10b 在乳腺癌中的作用提供更多糖组学方面的理论基础 关键词 miR-10b，MCF10A，N- 糖链，O- 糖链 学科分类号 Q81 DOI: 10.16476/j.pibb .20 17.0026 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一 根据中 生物学功能上，对于相应糖基转移酶的分子调控机 国癌症统计报告显示，近 10 年来乳腺癌发病呈持 制关注较少 续上升趋势，其中2015 年约新增26.86 万例乳腺 MiRNAs(microRNAs) 是真核生物中内源性的 癌发病病例，占女性新增癌症病例的15% ，位居 具有调控功能的非编码RNA ，其成熟体通过碱基 [1] 癌症发病之首，是女性癌症死亡的主要原因 互补配对的方式识别靶mRNA 并根据互补的程度 蛋白质糖基化是动物细胞中最常见的蛋白质翻 指导沉默复合体降解靶mRNA 或阻碍靶mRNA 的 [2] 译后修饰之一 ，超过70% 的蛋白质可发生糖基化 翻译 自1993 年Ambros 首次发现miRNA 以来， 修饰，主要包括N- 糖基化和O- 糖基化，可通过 miRNAs 的生物学功能不断得到诠释 科学家发现 影响蛋白质空间结构或决定其在细胞内的转运等调 miRNAs 在发育、器官形成、增殖及凋亡等许多生 节蛋白质的生物学功能 异常糖基化在肿瘤的发 物学过程中起到关键作用 MiRNA 在不同的肿瘤 生、发展过程中起关键作用，可参与癌细胞的信号 中可发生特异性表达，例如，miR-34a[7] 、miR-21[8] 通路、肿瘤细胞的扩散和侵袭、细胞与基质间的相 及miR-200[9] 等在乳腺癌中异常表达并逐渐成为乳 互作用、血管生成和免疫调节 异常糖基化主要包 腺癌的诊断和治疗靶标 其中miR- 10b 在乳腺癌组 括异常唾液酸化、异常岩藻糖化、分支型和平分型 织和乳腺癌细胞中均显著上调，可通过抑制 N- 糖的改变、截短型O- 糖的异常等 糖蛋白已成 为许多疾病的诊断标志物和治疗靶点，如前列腺癌 中的特异性抗原PSA[3] 、肝癌中的AFP[4] 、卵巢癌 * 国家自然科学基金面上项目和 苏省自然科学基金 的肿瘤抗原蛋白CA 125[5] 以及可能作为乳腺癌和前 (B资助项目. ** 通讯联系人. 列腺癌治疗靶点的Globo H[6] 都是