核蛋白和浆蛋白提取试剂盒.PDFVIP

核核蛋蛋 白白和和浆浆蛋蛋 白白提提取取试试剂剂盒盒 50T W LA020a 仅用于科学研 究,不能用于诊断 产 品信息 产 品名称 核蛋 白和浆蛋 白提取试剂盒 产 品概述 核蛋 白和浆蛋 白提取试剂盒（ Nuclea r a nd Cytoplasmic Protein Ext ract ion Kit）提供 了一种 比较简单 、方便 的从 细胞或组织 中提取细胞核蛋 白和浆蛋 白的方法 , 约90 min就可 以完成细胞核蛋 白与浆蛋 白的分离 。制备 的核蛋 白和浆 蛋 白能保持天然活性，且纯度较高 , 可用于Western blot、co-I P、EMSA（也称gel shift） 、foot print ing进一步的 转录 因子活性分析 、酶活性测定等后续蛋 白质研究 。 本试剂盒是通过细胞浆蛋 白提取试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放 出细胞浆蛋 白，然后通过离心得到细胞核沉淀 。最后通过高盐的细胞核蛋 白提取试剂C提取得到细胞核蛋 白。 包装信息 试 剂 名 称 W LA020a 细胞浆蛋 白抽提试剂A 细胞浆蛋 白抽提试剂B 细胞核蛋 白抽提试剂C 0.1M PMSF 0.1M DTT 50T 20 ml 1ml 5ml 0.4 ml 0.4 ml 保存条件 -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ 保存条件 本试剂盒各试剂均于-20℃保存， 自订购之 日起一年 内有效 。 注意事项 1. PMSF一定要在抽提试剂加入到样 品中前2-3min内加入， 以免PMSF在水溶液 中很快失效 。 2. 抽提蛋 白的所有步骤都需要在冰上或4℃进行 。 3. 抽提到 的核蛋 白和浆蛋 白均可直接用本公司生产 的BCA蛋 白浓度测定试剂盒（W LA004）测定蛋 白浓度 ，但不适 合用Bradford法测定蛋 白浓度 。 操作流程 1. 室温溶解试剂盒 中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上。取适量的细胞浆蛋 白抽提试剂A和细胞核蛋 白抽提试剂 C备用，在使用前数分钟 内加入PMSF和DTT，使其终浓度均为1mM。 6 7 2. 贴壁细胞：取培养细胞2x 10 -2x 10 个 , 弃培养液，用预冷的1x PBS洗2-3次，离心10 min（1000 rpm），弃上清 , 留下细胞沉淀备用 。 3. 悬浮细胞：用预冷的1x PBS洗一遍， 1000 rpm , 离心10 min，弃上清， 留下细胞沉淀备用 。 4 . 每20ul沉淀加入200μl添加 了PMSF和DTT的细胞浆蛋 白抽提试剂A。 5. 最高速剧烈涡旋5s，把细胞沉淀完全悬浮并分散开 , 冰浴10-15min。若没有完全分散开，可适 当延长涡旋 时间。 6. 加入10μl细胞浆蛋 白抽提试剂B，最高速剧烈涡旋5s，冰浴1min。 7. 最高速剧烈涡旋5s，12000 rpm , 4℃离心5min , 取上清即为细胞浆蛋 白。 8. 对于沉淀，完全 吸尽残余 的上清，加入50ul添加 了PMSF和DTT的细胞核蛋 白抽提试剂C。 9. 最高速剧烈涡旋15-30s后放 回冰浴 中，每 隔1-2min再涡旋15-30s，共30 min。