适体荧光分析法检测养殖废水中四环素类抗生素.pdf

第35卷 第7期 分析测试学报 Vo1．35No．7 2016年7月 FENXICESH1XUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis) 869—873 doi：10．3969／j．issn．1004—4957．2016．07．016 适体荧光分析法检测养殖废水 中四环素类抗生素 赵秋伶 ，张尤华，于晓艳 (辽宁工程技术大学 矿业技术学院，辽宁 葫芦岛 125105) 摘 要：建立了核酸适体识别 一荧光探针技术检测养殖废水中土霉素、四环素、金霉素及强力霉素4种四环 素类抗生素(TCs)总残留量的新方法。两段 DNA对 TCs共同识别后折叠成稳定的 “发卡型”双链结构，核酸 染料4-6．二脒基-2苯基吲哚(DAPI)能插入 “发卡”部位产生荧光信号发射 ，据此可实现对 TCs的定量检 测。在最优实验条件下，以土霉素为 目标分子建立工作曲线，在 10～50nmol／L范围内，荧光强度与对应浓 度呈良好线性关系，土霉素的检出限为2．3nmol／L。用四环素、土霉素、金霉素和强力霉素分别进行加标回 收实验，平均回收率为88．5％一102．3％，相对标准偏差 (n=5)为3．2％一6．7％。5个养殖场水样中均有TCs 检出，检出量在7．6～42．7nmol／L之间。该方法简单、灵敏、快速，可满足养殖场废水中TCs总残留量的测 定要求。 关键词：核酸适体；荧光分析法；四环素类抗生素；快速检测；废水 中图分类号 ：0657．6；R978．1 文献标识码 ：A 文章编号：1004—4957(2016)07—0869—05 DetectionofTetracyclineAntibioticsinAquacultureWastewater byDNA—basedFluorescenceAssay ZHAOQiu—ling ，ZHANGYou—hua．YUXiao—yan (CollegeofMiningIndustryTechnology，LiaoningTechnicalUniversity，Huludao 125105，China) Abstract：A novelanalysismethodbasedonspecificrecognitionofaptamerandfluorescenceprobe techniquewasestablishedforthedetectionoftotalresiduesoftetracyclineantibiotics(TCs)，inclu— dingoxytetracycline，tetracycline，ehlortetracyclineand~oxycyclineetc．inaquaculturewastewater． TwosegmentsofDNAswork togetherto identifyTCstofold intoa stable “hairpin”doublechain structurethatcanbeinsertedbynucleicaciddyeDAPItogenerateoffluorescenceemission．Based onthis，TCscanbequantified．Undertheoptimalexperimentalconditions，theworkingcurvewas establishedwithoxytetracyclineastargetmolecule，thefluorescenceintensityshowedagoodlinearre— lationshipwithconcentrationofoxytetracyclineintherangeof10—50nmol／L，andthedetectionlim— itofoxytetracyclinewas2．3nmol／L．When havingoxyt