细菌染色技术详解.pptVIP

军团菌 产气荚膜梭菌 巴斯德菌 霍乱弧菌 新型隐球菌 布鲁氏菌 涂片固定 酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检 标本处理 二、步骤 染色过程中的细菌颜色变化： 抗酸杆菌 非抗酸杆菌 三、结果: 抗酸菌———红色； 非抗酸菌——蓝色。 抗酸染色注意事项 每张玻片只能涂一个标本，以免染色过程中因冲洗使菌体脱落，造成阴阳性结果混淆； 注意生物安全，自我防护； 脱色时间依据涂片厚薄适当调整，以无红色为止。 ?? 抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风杆菌）和非抗酸菌。 荧光染色法 一、原理 抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄色。这种方法可用较低倍镜头镜检，因此能快速找出抗酸杆菌。 二、步骤： 涂片固定 金胺O染色 盐酸酒精脱色 复染 镜检 涂布均匀，不可过厚 时间可稍微延长，但不可少于规定时间 脱色时间依片子厚薄适当调整 复染时间不可过长 荧光显微镜观察有无黄绿色荧光 标本处理 三、结果: 阳性—明亮橘黄色荧光； 阴性—无荧光 三、临床应用： 荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。 四、注意事项： 荧光染色法可以作为分枝杆菌的初筛实验，初筛阳性的须做抗酸染色确认。 特殊结构染色法 细菌的某些基本结构如细胞壁、核质、胞浆颗粒和特殊结构如荚膜、芽孢、鞭毛等，用普通染色法不易着色，须用一些特殊染色法才能染上颜色。特殊染色法主要有荚膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、异染颗粒染色法等。这些染色法不仅能使特殊结构着色，还可使特殊结构染成与菌体不同的颜色，有利于观察和区别。 负染色法 所谓负染色法是指使背景着色而细菌本身不着色的一种染色方法。常用的有墨汁染色法。也可用酸性染料如刚果红或水溶性苯胺黑等进行染色。因酸性染料带负电荷，而细菌本身在近乎中性的环境中也带负电荷，同种电荷相排斥，故染色时菌体不着色，而只能使背景着色。实践中常用墨汁负染色法配合单染色法（如美兰染色法）检查细菌的荚膜，使背景成黑色；菌体呈蓝色；而荚膜不着色，从而使荚膜包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。 墨汁染色法 标本：脑脊液 处理方法：离心或用细胞离心机离心浓缩 染色方法：墨汁染色（负染色） 结果： 在细菌检验工作中，除异染颗粒染色法较常用外，由于其它特殊结构染色法操作费时，费用较高、染色过程要求非常严格，而普通染色法虽不能使特殊结构本身着色，但菌体着色后，荚膜和芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊染色法比较复杂，故日常工作中较少使用这些特殊结构染色法。 特殊染色 鞭毛染色 质量控制 每批或每天染色时应同步进行质控，质控方法如下： 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影响染色结果，如革兰氏阳性菌的 陈旧培养物也有出现革兰氏阴性的几率，所以被检菌的菌龄一般最好在 18~24h 之内。 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影响染色结果，如革兰氏阳性菌的 陈旧培养物也有出现革兰氏阴性的几率，所以被检菌的菌龄一般最好在 18~24h 之内。 染色方法 质控菌株 阳性 阴性 革兰染色 Sau ATCC25923 Eco ATCC25922 紫色 红色 抗酸染色 H37RV Eco ATCC25922 红色 蓝色 荧光染色 H37RV Eco ATCC25922 橘黄色荧光 无荧光 常见细菌图例 肺炎链球菌 无乳链球菌 化脓链球菌 缺陷乏养菌 脑膜炎奈瑟氏菌 淋病奈瑟菌 产单核李斯特菌 红斑丹毒丝菌 奴卡氏菌 豚鼠/嗜水气单胞 类鼻疽单胞菌 巴斯德菌属 阴道加特纳菌 细 菌 染 色 技 术 细菌染色方法 细胞不染色而背景染色 燃料与细胞结合而染色 常用的染色方法 革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步识别特殊形态 抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、麻风病等 荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；用于结核分枝杆菌等 其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量； 异染颗粒染色白喉棒状杆菌； 荚膜染色 常用燃料 碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。 酸性染料:显色离子带负电荷，易与带