南极产低温蛋白酶菌株Marinobactersp.R2的.PDFVIP

第 43 卷 　第 6 期 ( ) Vol. 43 　No. 6 厦门大学学报 自然科学版 　2004 年 11 月 Journal of Xiamen University (Natural Science) Nov. 2004 　 ( ) 文章编号 2004 南极产低温蛋白酶菌株 Marinobacter sp . R2 的 发酵条件及酶学性质研究 1 2 1 2 林念炜 ,张　锐 ,赵　晶 , 曾润颖 ( 1. 厦门大学生命科学学院 ,福建 厦门 361005 ; 2. 国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室 ,福建 厦门 361005) 摘要 : 从南极海域沉积物中筛选到一产蛋白酶的菌株 R2 ,经细菌学形态特征鉴定及 16S rDNA 序列分析鉴定 ,该菌 ( ) . 生长特性研究表明该菌株属于兼性嗜冷菌 ,其最适生长温度为 10～15 ℃. R2 菌株能 株属于海杆菌属 Marinobacter 利用多种碳源产酶 ,最适产酶温度为 20 ℃. 粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE cellulose52 柱层析进行初步分离纯化后进行 酶学性质的研究. 该菌株所分泌蛋白酶的最适作用温度为 20 ℃,最适pH 值为 9～10 ,对热敏感 ,是典型的低温碱性蛋 白酶. Ca2 + 、Mn2 + 、Cu2 + 对该蛋白酶有较为明显的激活作用 ,而 Cd2 + 、Co2 + 则能抑制酶活. 高浓度的变性剂、PMSF 、 AEBSF 和 EDTA 都能抑制该蛋白酶 ,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶 ,且金属离子对酶活性中心构象有关键性的影响. 关键词 : 低温碱性蛋白酶 ;海杆菌 ;兼性嗜冷菌 ;发酵条件 ;酶学性质 中图分类号: Q 936 文献标识码 :A 　　　　　　　　　　　　　　　 　　蛋白酶是一类非常重要的工业用酶 , 已广泛应 R2 ,应用 16S rDNA 作为分子指标对其进行分类鉴 用于制革、纺织、洗涤、医药和食品等工业. 目前投入 定 ,并进一步对其发酵条件及其酶学性质进行研究 应用的一般都是中温蛋白酶 ,其最适酶活温度多数 分析. 为 50 ℃,产酶菌的最适生长与产酶温度均在 30 ℃以 上[1 ] . 目前的报道中,低温蛋白酶的最适酶活温度一 1 　材料与方法 [2 ] [3 ] 般在 30 ～40 ℃ ,最低的为 25 ℃ . 由于低温蛋白 1. 1 　菌株来源 酶具有反应温度低 ,对热敏感等特点 ,所以与中温蛋 菌株 R2 系本实验室从南极普利兹湾深海泥样 白酶相比,低温蛋白酶有着无法取代的优越性. 中筛选保藏 ,该泥样于 2001 年 11 月～2002 年 4 月